OE19人(ren)食管(guan)細(xi)胞

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再輕(qing)輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例(li)進行分瓶(ping)傳(chuan)代，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕(qing)輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並放置(zhi)於凍(dong)存(cun)管中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍(dong)存(cun)管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮中進(jin)行長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程序

降溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供參(can)考，具(ju)體操作(zuo)步驟以(yi)隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並檢查細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果細(xi)胞密度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上(shang)清，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離子的PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使(shi)消化(hua)液(ye)浸(jin)潤所(suo)有(you)細(xi)胞，將培養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況(kuang)而定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大(da)部分變圓並脫落，迅(xun)速(su)拿回操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。輕(qing)輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分到(dao)新的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新皿中或者(zhe)瓶中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生長(chang)狀(zhuang)態良好時(shi)，可(ke)進(jin)行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及細(xi)胞培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入無菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞數量加(jia)入(ru)無血清細(xi)胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮灌儲存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿取。

三、培養(yang)註意事(shi)項 

1. 收到細(xi)胞後(hou)首先(xian)觀察(cha)細(xi)胞瓶是(shi)否完好，培養(yang)液(ye)是(shi)否有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述現象(xiang) 發生請及時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書(shu)，了解細(xi)胞相關(guan)信息，如細(xi)胞形態、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血清比例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因子等，確(que)保(bao)細(xi)胞培養(yang)條件壹(yi)致(zhi)，若由於培養(yang)條件不壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現(xian)問題，責任(ren)由 客(ke)戶自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦拭細(xi)胞瓶表(biao)面，顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態。因(yin)運輸問題，部分細(xi)胞由於溫度(du) 變化及劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破碎形成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可(ke)以(yi)消化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞直(zhi)接(jie)混勻收(shou)集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)胞，並接種到(dao)新的培(pei)養(yang)瓶或培養(yang)皿中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶用(yong)相同(tong)條件(jian)的培(pei)養(yang)基用(yong)於細(xi)胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶收到細(xi)胞後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態，便於和我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部溝通 交(jiao)流。由於運輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞會出(chu)現(xian)不穩定(ding)的情(qing)況(kuang)，請及時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至問題解(jie)決。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註：運輸用(yong)的培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培養(yang)基) 不能再用(yong)來培(pei)養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用(yong)按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培 養(yang)條件新配制(zhi)的培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收到細(xi)胞後(hou)第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

TNFSF11 Others Mouse 小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠(Pepsin)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 HL(Mouse hepatic lipase)  小(xiao)鼠肝脂酶 96T

MTGR1： 髓易(yi)位(wei)基因(yin)相關(guan)蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體 人(ren)少突(tu)膠質(zhi)前體(ti)細(xi)胞(懸(xuan)浮生長(chang))cDNAHOPC-os cDNA

L W-3A小鼠皮下(xia)結締組(zu)織(zhi)細(xi)胞 L W-3A mice subcutaneous connective tissue cells DMEM培養(yang)基+10%FBS 大(da)鼠胃腸癌(ai)標(biao)誌物CA199ELISA 試(shi)劑(ji)盒 UK  大(da)鼠 96T

BBS6： 巴德(de)-畢德(de)氏(shi)綜(zong)合征(zheng)蛋(dan)白BBS6抗體 HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

CL-0282HO-8910PM(人(ren)高(gao)轉移卵(luan)巢(chao)癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2 大(da)鼠尾加(jia)壓素(su)II(Urotensin II) ELISA試(shi)劑(ji)盒 VCAM-1/CD106(Human Vascuolar cell adhesion molecule 1)  人(ren)血管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞粘附分(fen)子(zi)1 96T

Phospho-IRAK1 (Thr209)： 0酸(suan)化(hua)白(bai)介(jie)素(su)-1受(shou)體相關(guan)激(ji)酶(mei)1抗(kang)體 EB病毒轉化的人(ren)B淋巴(ba)細(xi)胞;KMY0923

NIH/3T3(小鼠胚胎(tai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 人(ren) EVI2A 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 人(ren)成骨(gu)生長(chang)肽(tai)(OGP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Inhibin beta A peptide 抑(yi)制(zhi)素(su)beta A抗原(yuan) 0.5mg

Phospho-IRAK1 (Thr387)： 0酸(suan)化(hua)白(bai)介(jie)素(su)-1受(shou)體相關(guan)激(ji)酶(mei)1抗(kang)體 小鼠顆粒細(xi)胞MGC

CCL1 Protein Human 重組人(ren) I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白(bai) 人(ren)超氧化物歧化(hua)酶(SOD)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Inhibin beta B 抑(yi)制(zhi)素(su)βB抗原(yuan) 0.5mg

IRF3： 幹(gan)擾素(su)調(tiao)節因子3 0.1ml

OE19人(ren)食管(guan)細(xi)胞小鼠神經(jing)幹(gan)細(xi)胞 大(da)鼠酯轉移蛋(dan)白(bai)(CETP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 LH(Human luteotropic hormone)  96T

phospho-PKC delta (Tyr52)： 0酸(suan)化(hua)蛋(dan)白(bai)激(ji)酶C亞性D型抗體 FAM3D Others Mouse 小鼠 FAM3D / Oit1 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

OVCaR-3 人(ren)卵(luan)巢(chao)癌(ai)細(xi)胞 大(da)鼠7α-羥化(hua)酶(mei)(CYP7A1)ELISA試(shi)劑(ji)盒 PS(Human Prednisolone)  人(ren)龍(long) 96T

phospho-PKC delta (Thr505/507)： 0酸(suan)化(hua)蛋(dan)白(bai)激(ji)酶C亞性D型抗體 Y2細(xi)胞，小鼠成纖(xian)維細(xi)胞 人(ren)卵(luan)巢(chao)耐藥(yao)株,COC1/CDDP細(xi)胞 人(ren)食道(dao)上(shang)皮細(xi)胞裂(lie)解(jie)物HEEpiCL

LOXL2 Others Human 人(ren) LOXL2 / Lysyl oxidase homolog 2 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠24S-羥化(hua)酶(mei)(CYP46)ELISA試(shi)劑(ji)盒 LEP(Human Leptin)  人(ren)瘦素(su) 96T