OVCAR-3人(ren)卵巢腺(xian)癌細(xi)胞(bao)

公司(si)產品僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得用於臨床(chuang)診斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培養瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養瓶中的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶中，倒(dao)置顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加入 5ml 培養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進行分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培養瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養瓶中的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶中，倒(dao)置顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加入培養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於凍存管中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移(yi)入-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中進行長(chang)期保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程序(xu)

降溫盒可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存處理(li)僅(jin)供(gong)參考，具體(ti)操作(zuo)步(bu)驟以隨(sui)貨(huo)產品說(shuo)明書(shu)為主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存管在 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃(huang)解(jie)凍，加4 mL培養基(ji)混合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培養基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養瓶中培(pei)養過夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基(ji)，培養過夜）。第(di)二天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄去培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不含(han)鈣、鎂離子(zi)的(de)PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤所有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養瓶置於37℃培養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大部(bu)分變(bian)圓(yuan)並脫落，迅速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾下培養瓶後(hou)加2-3ml培養基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕(qing)打勻後(hou)裝入無(wu)菌離心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培養液後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比例(li)分(fen)到新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新(xin)皿中或(huo)者瓶中，置於培養箱中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝入無(wu)菌離心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清洗壹遍(bian)，棄盡PBS，進行細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加入無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍存液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每支凍存管凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍存管做好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存管位置以便下次(ci)拿(na)取(qu)。

三(san)、培(pei)養註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完好(hao)，培(pei)養液是(shi)否有(you)漏液、渾(hun)濁等現(xian)象，若有上(shang)述(shu)現(xian)象 發(fa)生請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所用培養基(ji)、血清(qing)比例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因子等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條件壹致(zhi)，若由於培養條件不壹致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任由(you) 客戶自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運輸問(wen)題，部(bu)分細(xi)胞(bao)由(you)於溫度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形成(cheng)碎片，是(shi)正常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於 37℃培養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種到新的(de)培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿中，置於培養箱中進行培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相同(tong)條(tiao)件的(de)培(pei)養基(ji)用於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便於和我(wo)司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由(you)於運輸的(de)原因，個別敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告知細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我們的(de)技(ji)術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培(pei)養基(ji) (灌液培(pei)養基(ji)) 不能再用來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件新(xin)配制(zhi)的(de)培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。

公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品：

HA Others H6N4 甲(jia)型流(liu)感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝(ning)素 (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 大鼠(shu)1(VK1)ELISA試(shi)劑(ji)盒 sTRAIL(Human soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand)  人(ren)可(ke)溶性(xing)壞(huai)死(si)因子相關(guan)雕(diao)亡(wang)誘(you)導(dao)配體 96T

MDM2BP： 雙(shuang)微(wei)體2癌基(ji)因結合蛋(dan)白(bai)抗體(ti) 人(ren)脈絡叢(cong)內皮(pi)細(xi)胞(bao)cDNAHCPEC cDNA

HUVEC[HUV-EC-C]人(ren)臍靜(jing)脈(mai)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao) Human umbilical vein endothelial cells HUVEC[HUV-EC-C] DMEM+10%FBS 大鼠(shu)1(VK1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 TRAIL-R4(Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 4)  人(ren)壞(huai)死(si)因子相關(guan)雕(diao)亡(wang)誘(you)導(dao)配體4 96T

MMP20： 基(ji)質(zhi)金(jin)屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶20 0.1ml

Rhesus antibody Rh FBXO24 FBXO24蛋(dan)白(bai)抗體(ti) HA Others H1N1 甲(jia)型流(liu)感 H1N1 (A/California/07/2009) 血凝(ning)素 (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

IRF7： 幹(gan)擾素調(tiao)節(jie)因子7抗體(ti) CM-R079大鼠(shu)冠狀(zhuang)動脈(mai)平(ping)滑肌細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji)100mL

7WCY1.0細(xi)胞(bao)，人(ren)APP-PS1(C410Y)雙(shuang)基(ji)因轉(zhuan)染(ran)細(xi)胞(bao)株豹貓肺成(cheng)纖(xian)維(wei)樣(yang)細(xi)胞(bao);LCL4 人(ren)超(chao)敏(min)C反(fan)應(ying)蛋白(bai)(hs-CRP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Integrin alpha 1 整(zheng)合素α1抗原 0.5mg

Phospho-IRF7 (Ser471 + Ser472)： 0酸(suan)化(hua)幹擾素調(tiao)節(jie)因子7抗體(ti) CFH Others Human 人(ren) CFH / Compleme Factor H 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

KM小(xiao)鼠腦神經膠(jiao)質(zhi)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)瘤(liu)株;G422 人(ren)超(chao)抗(kang)原(Sag)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Integrin Alpha4 Beta7/LPAM-1 (Lymphocyte Peyer’s patch Adhesion Molecule 1/Integrin alpha4,beta7) 整(zheng)合素α4β7抗原 0.5mg

phospho-IRS1(Ser302)： 0酸(suan)化(hua)胰(yi)島素受體(ti)底(di)物-1抗(kang)體 EB病毒(du)轉(zhuan)化(hua)的(de)人(ren)B淋巴細(xi)胞(bao);KMY0926

OVCAR-3人(ren)卵巢腺(xian)癌細(xi)胞(bao)人(ren)胚胎，皮(pi)膚，肌肉(rou);M-22 人(ren)食(shi)管(guan)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji) 100mL 大鼠(shu)單酰脫(tuo)羧(suo)酶(MLYCD)ELISA試(shi)劑(ji)盒 EPO(Human Erythropoietin)  人(ren)紅細(xi)胞(bao)生(sheng)成(cheng)素 96T

PCSK4： 原蛋(dan)白(bai)轉(zhuan)化(hua)酶4抗(kang)體 破(po)骨(gu)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

小(xiao)鼠海馬(ma)神(shen)經膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)(EGFP標(biao)記(ji)) 大鼠(shu)單酰(malonyl CoA)ELISA試(shi)劑(ji)盒 EPOR(Human Erythropoietin receptor)  人(ren)紅細(xi)胞(bao)生(sheng)成(cheng)素受體(ti) 96T

PMCA1： 細(xi)胞(bao)膜(mo)鈣ATP酶(mei)1抗體 GLIPR1 Others Mouse 小鼠(shu) GLIPR1 / RTVP1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

P388D1 小(xiao)鼠淋巴樣(yang)瘤(liu)細(xi)胞(bao) 大鼠(shu)單核(he)細(xi)胞(bao)趨(qu)化(hua)蛋白(bai)4(MCP-4/CCL13)ELISA試(shi)劑(ji)盒 TUBB(Human Beta-tubulin)  人(ren)β-微(wei)管蛋白(bai) 96T