P53R JHU-56 人結直(zhi)腸癌細胞

公(gong)司產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研研究使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微鏡下觀察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入 5ml 培(pei)養

液終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之脫落(luo)，然後將懸液轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細胞用 1-2ml 培(pei)養基重懸，然後按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代，最後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生長至覆蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微鏡下觀察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入培(pei)養液終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之脫落(luo)，然後將懸液轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存(cun)管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入液氮中(zhong)進(jin)行(xing)長期保存(cun)。使(shi)用程序

降溫盒可直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二、細胞培(pei)養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以下細胞培(pei)養凍(dong)存(cun)處理(li)僅供參考，具體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以隨貨產(chan)品(pin)說明(ming)書為(wei)主。將(jiang)含(han)有1 mL細胞懸液的凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基混合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養基後吹(chui)勻(yun)。然後將所有細胞懸液加入含(han)適量(liang)培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜（或(huo)將細胞懸液加入10 cm皿中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜）。第二天(tian)換液並檢查(zha)細胞密度。

2) 細胞傳代：如(ru)果細胞密度達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳代培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所有細胞，將培(pei)養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然後在顯微(wei)鏡下觀察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞大部分(fen)變(bian)圓並脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養基終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸液按1:2比例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的新皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待細胞生長狀態良(liang)好(hao)時，可進(jin)行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集細胞及細胞培(pei)養液，裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行(xing)細胞計數(shu)。

b、根(gen)據細胞數(shu)量(liang)加入無血清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每(mei)支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細胞懸液，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識(shi)。將凍(dong)存(cun)管(guan)放入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入液氮灌(guan)儲存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置以便下次拿取。

公(gong)司正在出(chu)售的產(chan)品(pin)：

IL33 Protein Human 重(zhong)組(zu)人(ren) IL33 / Ierleukin-33 / NF-HEV 蛋白(bai) 大鼠維(wei)生(VD)ELISA試劑(ji)盒(he) TNF- Beta(Human Tumor necrosis factor Beta)  人壞(huai)死因子(zi)β 96T

MAP1B： 微(wei)管(guan)相關蛋白(bai)1B抗體(ti) CHEK2 Others Mouse 小鼠 CHK2 / CHEK2 桿狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂解液 (陽性對(dui)照(zhao))

小鼠胰(yi)腺上(shang)皮細胞培(pei)養基 100mL 大鼠維(wei)生(VD)ELISA 試劑(ji)盒(he) HBsAg(Mouse hepatitis B virus surface antigen)  小鼠乙型(xing)肝炎(yan)表面抗(kang)原(yuan) 96T

MSH3： 錯配(pei)修復(fu)蛋白(bai)3抗體(ti) JAR細胞，胎盤(pan)絨(rong)毛癌細胞 人食管(guan)鱗癌,KYSE30細胞 中(zhong)國倉鼠卵(luan)巢(chao)細胞系(xi);pDSr a2-mpl-X

SCN3B Others Human 人(ren) SCN3B 人(ren)細胞裂解液 (陽性對(dui)照(zhao)) 大(VC)ELISA試劑(ji)盒 IL-2R  大鼠白介(jie)素(su)2受(shou)體(ti) 96T

IP3： 三(san)0酸(suan)肌(ji)醇抗(kang)體(ti) EPHA3 Others Mouse 小鼠 EphA3 (aa 569-984) 桿狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂解液 (陽性對(dui)照(zhao))

人(ren)食管(guan)上(shang)皮細胞培(pei)養基 100mL 人布氏菌(jun)(Brucellosis)抗體(ti)ELISA試劑盒(he) Integrin Alpha5(ITG- AlphaV/CD49e) 粘(zhan)附(fu)分(fen)子(zi)整(zheng)合素(su)α5抗原(yuan) 0.5mg

IL18BP： 白(bai)細胞介素(su)18結合蛋白(bai)抗體(ti) 非洲綠猴(hou)腎(shen)細胞;GL-37 鼻咽(yan)癌細胞，CNE細胞 AsPC-1(轉移(yi)胰(yi)腺腺癌細胞)

BPIFA2 Others Human 人(ren) BPIFA2 / C20orf70 人(ren)細胞裂解液 (陽性對(dui)照(zhao)) 人布氏桿菌(jun)抗體(ti)IgM ELISA試劑盒(he) Integrin alpha V/CD51 peptide 整(zheng)合素(su)αV抗原(yuan) 0.5mg

IDH2： 草酰(xian)琥珀(po)酸(suan)脫(tuo)羧酶抗(kang)體(ti) CM-R063大鼠腎(shen)小球內皮(pi)細胞培(pei)養基100mL

P53R [JHU-56]  人(ren)結直(zhi)腸癌細胞RAPGEF5/Repac： Rap鳥核苷酸交換因(yin)子(zi)(GEF)5抗(kang)體(ti) 非洲綠猴(hou)腎(shen)細胞;BS-C-1

人(ren)胚(pei)胎(tai)肺成纖維(wei)細胞;WI-38 人腸(chang)微(wei)血管(guan)內皮(pi)細胞培(pei)養基 100mL 大鼠單核(he)細胞趨(qu)化蛋白(bai)1(MCP-1)ELISA試劑(ji)盒 HPV-IgM(Human papillomavirus IgM)  人狀瘤(liu)病毒(du)抗體(ti) 腦(nao)膜細胞Many types of cells包裝：5 × 105次(ci)方(1ml)

小鼠神(shen)經幹細胞(EGFP標(biao)記(ji)) 大鼠單核(he)細胞趨(qu)化蛋白(bai)1(MCP1)ELISA試劑(ji)盒 HPV-IgG(Human papillomavirus IgG)  人狀瘤(liu)病毒(du)抗體(ti) S100A4 Others Mouse 小鼠 S100A4 人細胞裂解液 (陽性對(dui)照(zhao))

PA319 人(ren)大腸癌細胞 大鼠單胺(an)氧(yang)化(hua)酶A(MAOA)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) HSV-Ag2(Human Herpes simplex virus 2)  人(ren)單皰(pao)疹(zhen)病毒(du)抗原(yuan)2 96T

RNF135： 環指蛋白(bai)135抗體(ti) HEPA1-6細胞，小鼠肝癌細胞 人卵(luan)巢(chao)癌細胞,OVCaR-3細胞 人膀(pang)胱(guang)平(ping)滑(hua)肌細胞裂解物HBdSMCL

三(san)、培(pei)養註(zhu)意事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞瓶(ping)是否完(wan)好(hao)，培(pei)養液是否有(you)漏液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有上(shang)述現(xian)象 發生請及時(shi)和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細閱讀(du)細胞說明(ming)書，了(le)解細胞相關信息，如(ru)細胞形(xing)態、所用培(pei)養基、血清(qing)比例(li)、所需 細胞因子(zi)等，確(que)保(bao)細胞培(pei)養條件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培(pei)養條件不(bu)壹致(zhi)而導致(zhi)細胞出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任(ren)由 客戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭細胞瓶(ping)表面，顯(xian)微(wei)鏡下觀察(cha)細胞狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題，部分(fen)細胞由於(yu)溫度 變(bian)化及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破碎(sui)形(xing)成碎片，是正常(chang)現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細胞狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接(jie)混勻收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培(pei)養基重懸 細胞，並接(jie)種到(dao)新的(de)培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請客戶(hu)用(yong)相同(tong)條件的(de)培(pei)養基用於(yu)細胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後前 3 天(tian)各拍(pai)幾張細胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀態(tai)，便(bian)於(yu)和我司技術部溝通 交流(liu)。由於(yu)運輸(shu)的原因，個別敏(min)感細胞會出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的情(qing)況(kuang)，請及時(shi)和我們(men)聯系(xi)，告知細胞 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以便我(wo)們(men)的技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至問(wen)題解決。

7. 該細胞僅供(gong)科(ke)研使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運輸用的(de)培(pei)養基 (灌(guan)液培(pei)養基) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養細胞，請換用(yong)按照(zhao)說明(ming)書細胞培(pei) 養條件新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養基來培(pei)養細胞。     收(shou)到(dao)細胞後第壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。