Panc 03.27人胰(yi)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)

公司(si)產品僅供(gong)科研研究(jiu)使用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床診斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養

液終止消化，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例進行分(fen)瓶(ping)傳代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培養液終

止消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放置於(yu)凍(dong)存管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮中(zhong)進(jin)行(xing)長期保(bao)存。使用(yong)程序

降(jiang)溫盒可(ke)直接放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存處(chu)理(li)僅供(gong)參(can)考，具(ju)體操作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨貨產品說明書為主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管在 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然後(hou)將所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適量(liang)培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜）。第二天換液並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳代培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消化液浸(jin)潤(run)所有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況而定），然(ran)後(hou)在顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化情況，若細(xi)胞(bao)大部分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後(hou)裝入無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例分到新的(de)含8 mL培養基(ji)的(de)新皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為例；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝入無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管放入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮灌(guan)儲存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存管位置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿取(qu)。

公司(si)正(zheng)在出售(shou)的(de)產品：

PC-3M-2B4(人前(qian)列腺(xian)癌(ai)低轉移(yi)細(xi)胞(bao)株(zhu)) 5×106cells/瓶(ping)×2 CHO/dhFr-(中(zhong)國(guo)倉(cang)鼠二氫還(hai)原酶缺(que)陷(xian)細(xi)胞(bao)) 大鼠(shu)維生(sheng)素B6(VB6)ELISA 試(shi)劑盒 ADM  大鼠(shu)腎(shen)上(shang)腺(xian)髓(sui)質素 96T

MCSF： 巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)克(ke)隆(long)刺(ci)激因子(zi)抗(kang)體 小(xiao)鼠黑(hei)色(se)素瘤細(xi)胞(bao);B16

IL1A Protein Human 重組(zu)人 IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 蛋(dan)白 大鼠(shu)維生(sheng)素B12(VB12)ELISA試(shi)劑盒 TNFsR- II (Human Tumor necrosis factor soluble receptor II )  人壞(huai)死因子(zi)可(ke)溶性受體Ⅱ 96T

4-Mar： 膜(mo)相(xiang)關(guan)環(huan)指(zhi)蛋(dan)白4抗(kang)體 ALDH3A1 Others Human 人 ALDH3A1 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao))

小(xiao)鼠甲(jia)狀腺(xian)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji) 100mL 大鼠(shu)維生(sheng)素B12(VB12)ELISA 試(shi)劑盒 Beta-EPR  大鼠(shu)β內啡肽(tai)受體 96T

Igj： 免(mian)疫(yi)球蛋(dan)白j鏈(lian)抗(kang)體 大鼠(shu)黑質(zhi)神經(jing)元RN-sn

CXCL16 Protein Rat 重組(zu)大鼠(shu) CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (Fc 標簽) 人不(bu)耐熱腸(chang)毒(du)素B亞(ya)單(dan)位(LTB)ELISA 試(shi)劑盒 JNK1/3 (c-Jun amino-terminal kinase 1/3) c-Jun基末端激酶1/3多(duo)肽(tai)抗(kang)原 0.5mg

IP3 receptor： 5-三(san)0酸(suan)肌(ji)醇受體1抗(kang)體 KEAP1 Others Human 人 KEAP1 / INRF2 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao))

人食管平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji) 100mL 人不(bu)對稱二甲(jia)基精酸(suan)(ADMA)ELISA 試(shi)劑盒 phospho-JNK1/2/3(pThr183/pTyr185) peptide 0酸(suan)化基末(mo)端激酶1/2/3(pJNK1/2/3)抗(kang)原 0.2ml

ITPR2： 5-三(san)0酸(suan)肌(ji)醇受體2抗(kang)體 恒(heng)河猴(hou)腎(shen)細(xi)胞(bao);LLC-MK2 膀(pang)胱(guang)癌(ai)細(xi)胞(bao)，RT4細(xi)胞(bao) U-2 OS(骨(gu)肉(rou)瘤細(xi)胞(bao))

Panc 03.27人胰(yi)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)RINT1： 胞(bao)膜(mo)間內質網調(tiao)節蛋(dan)白1抗(kang)體 非洲綠猴(hou)腎(shen)細(xi)胞(bao);VERO E6

人淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao);1301 人腸(chang)動(dong)脈內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji) 100mL 大鼠(shu)催(cui)乳(ru)素誘(you)導蛋白(PIP)ELISA試劑盒 PC/CPG(Human choline phosphoglyceride)  人0酸(suan)甘(gan)油(you)酯(zhi) 96T

RMND1： 減數(shu)分裂(lie)同源(yuan)蛋白1抗(kang)體 腦靜(jing)脈血(xue)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次方(1ml)

人腦(nao)微血管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao) 大鼠(shu)催(cui)乳(ru)素(PRL)ELISA試(shi)劑盒 TBA(Human Total bile acide)  人總(zong)膽汁酸(suan) 96T

RASSF7： RAS家(jia)族關(guan)聯(lian)結構(gou)域蛋白7抗(kang)體 TSPAN1 Others Human 人 TSPAN1 (aa 110-211) 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao))

三(san)、培(pei)養註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞(bao)後(hou)首先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養液是(shi)否(fou)有(you)漏液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上述現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所用(yong)培(pei)養基(ji)、血(xue)清(qing)比例、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培養條(tiao)件不(bu)壹致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出現問題(ti)，責(ze)任(ren)由 客戶自行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面，顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度(du) 變化及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形(xing)成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以消化，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混(hun)勻收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的(de)培(pei)養基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新的(de)培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請客(ke)戶用(yong)相(xiang)同條件的(de)培(pei)養基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客戶收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾張細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便(bian)於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術部溝(gou)通 交流。由於(yu)運輸(shu)的(de)原(yuan)因，個別(bie)敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩(wen)定的(de)情況，請及(ji)時(shi)和我(wo)們聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情況，以便(bian)我(wo)們的(de)技(ji)術人員(yuan)跟蹤回(hui)訪(fang)直至(zhi)問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研使用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養基(ji) (灌(guan)液培養基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培養細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按(an)照說明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新配制(zhi)的(de)培(pei)養基(ji)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第壹次傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。