Panc 05.04人胰腺癌上(shang)皮(pi)細胞

公司產品僅供(gong)科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用於(yu)臨床診斷！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察，待細胞回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再輕輕(qing)吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱細胞用 1-2ml 培養基重懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察，待細胞回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並放(fang)置於(yu)凍存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞凍存(cun)管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進行(xing)長(chang)期保存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降溫盒可(ke)直接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇細胞：以下(xia)細胞培養凍存(cun)處(chu)理(li)僅供(gong)參(can)考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產品說明(ming)書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅(xun)速搖晃(huang)解(jie)凍，加4 mL培養基混合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培養基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)含適量(liang)培養基的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過夜（或將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培養基，培養過夜）。第二(er)天換液(ye)並檢查細胞密度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密度(du)達 80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳(chuan)代(dai)培養。

a、棄去培養上(shang)清，用不含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所有(you)細胞，將(jiang)培養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視細胞情況而(er)定），然後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細胞消(xiao)化情況，若(ruo)細胞大部分(fen)變圓(yuan)並脫落，迅速拿回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕輕打(da)勻後(hou)裝入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養基的(de)新皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細胞凍存(cun)：待細胞生(sheng)長(chang)狀態(tai)良(liang)好(hao)時，可進行(xing)細胞凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集細胞及細胞培養液(ye)，裝入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清液(ye)，用PBS清洗壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計數。

b、根(gen)據(ju)細胞數量加入(ru)無血(xue)清細胞凍存(cun)液(ye)，使(shi)細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

三、培養註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後(hou)首先觀察細胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養液(ye)是否(fou)有(you)漏液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細閱讀細胞說明(ming)書，了(le)解(jie)細胞相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細胞形態、所用(yong)培養基、血(xue)清比例(li)、所需 細胞因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細胞培養條件(jian)壹致，若(ruo)由(you)於(yu)培養條件(jian)不壹致而(er)導(dao)致(zhi)細胞出現問題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細胞狀態。因(yin)運輸問題，部分(fen)細胞由於(yu)溫度 變化及劇烈(lie)碰(peng)亡破碎形成碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察好細胞狀態後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞直接混勻收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮的(de)培養基重懸(xuan) 細胞，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養瓶(ping)或培養皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同條件(jian)的(de)培養基用於(yu)細胞培養。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞狀態，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由於(yu)運輸的(de)原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏感(gan)細胞會出現不穩定(ding)的(de)情況，請(qing)及時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系，告知細胞 的(de)具體情況，以便(bian)我(wo)們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回訪直至問題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞僅供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸用的(de)培養基 (灌液(ye)培養基) 不能再用來(lai)培養細胞，請(qing)換用按(an)照(zhao)說明(ming)書細胞培 養條件(jian)新配制的(de)培養基來(lai)培養細胞。     收(shou)到(dao)細胞後(hou)第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的(de)產品：

CL-0247ZR-75-1(人(ren)癌細胞)5×106cells/瓶(ping)×2 大(da)鼠(shu)微(wei)纖(xian)絲(si)相(xiang)關(guan)糖蛋白3(MFAP3)ELISA試(shi)劑盒 TNFsR- I (Human Tumor necrosis factor soluble receptor I )  人(ren)壞死因(yin)子可溶(rong)性受(shou)體Ⅰ 96T

Monoamine Oxidase B： 單胺(an)氧化酶B抗(kang)體 tTA基(ji)因(yin)修飾(shi)的(de)小鼠(shu)畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-3A1

PC-3M-IE8(人(ren)前列腺癌高轉移細胞株) 5×106cells/瓶(ping)×2 Lec1(卵(luan)巢(chao)細胞) 大鼠微纖(xian)絲(si)關(guan)聯(lian)蛋白4(MFAP4)ELISA試(shi)劑盒 CAMK 2  大(da)鼠(shu)鈣(gai)/鈣(gai)調(tiao)素依賴性蛋(dan)白激酶(mei)2 96T

MCM4： 染色體維(wei)持缺陷(xian)蛋(dan)白4抗(kang)體 小(xiao)鼠(shu)癌細胞;CCC-Ca761-03

IL1RN Protein Human 重(zhong)組(zu)人 IL-1RA / IL1RN 蛋(dan)白 大鼠微(wei)粒(li)體S轉移酶2(MGST2)ELISA試(shi)劑盒 Mouse trypsin  小(xiao)鼠(shu) 96T

IGSF12： 免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋白超家(jia)族(zu)成員(yuan)12抗(kang)體 EB病(bing)毒轉化的(de)人B淋巴(ba)細胞;HH-29

OK(負(fu)鼠腎(shen)小管(guan)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 人(ren) AMBP / Alpha 1 microglobulin 人(ren)細胞裂解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 人補體片(pian)斷5b(C5b)ELISA 試(shi)劑盒 phospho-Klf5/CKLF/Kruppel like factor 5, Human, mo, rat, horse, bovine, rabbit, pig, dog 0酸(suan)化腸道內(nei)富(fu)含的(de)Kruppel樣因(yin)子5抗(kang)原(yuan) 0.5mg

IDH3A： 草(cao)酰琥珀(po)酸脫羧酶α抗(kang)體 人(ren)臍(qi)靜(jing)脈平(ping)滑肌(ji)細胞HUVSMC

IL8 Protein Canine 重(zhong)組(zu)狗(gou) IL-8 / CXCL8 蛋白 人補體片(pian)斷5a(C5a)ELISA 試(shi)劑盒 LDH(Lactate Dehydrogenase) 乳酸(suan)脫氫酶抗(kang)原(yuan) 0.5mg

IFNA5： 幹(gan)擾素alpha 5蛋白抗(kang)體 ESM1 Others Human 人(ren) ESM1 / Endocan 桿(gan)狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲(chong)細胞裂解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

Panc 05.04人(ren)胰腺癌上(shang)皮(pi)細胞REEP5： 受(shou)體表達蛋白5/息(xi)肉(rou)相(xiang)關(guan)蛋白抗(kang)體 IFNB1 Others Human 人(ren) Ierferon beta / IFN-beta / IFNB 人(ren)細胞裂解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

人(ren)前列腺成纖(xian)維(wei)細胞RNAHPrF miRNA5 μg 大鼠催(cui)產素(OT)ELISA 試(shi)劑盒 sLOX-1(Human Soluble Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1)  人(ren)可(ke)溶(rong)性凝(ning)集素樣氧化低(di)密度(du)脂(zhi)蛋白受體1 96T

FAM64A： 染色體分(fen)離(li)調(tiao)節蛋(dan)白1抗(kang)體 SV40轉化的(de)非洲(zhou)綠(lv)猴腎(shen)細胞;COS-1

人(ren)臍靜脈內(nei)皮(pi)細胞(人膀胱(guang)癌細胞汙(wu)染);ECV-304 [ECV304;ECV 304] 人腸靜脈(mai)內(nei)皮(pi)細胞培養基 100mL 大鼠(shu)簇(cu)集蛋(dan)白(CLU)ELISA試(shi)劑盒 3-NT(Human 3-Nitrotyrosine)  人(ren)3-硝基酪(lao)酸(suan) 96T

RFC1： 復(fu)制激活因(yin)子C1抗(kang)體 腦(nao)動(dong)脈(mai)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞Many types of cells包裝：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)