MCF-10A人乳(ru)腺上皮(pi)細胞

公司產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研研(yan)究使用(yong)、不得(de)用(yong)於臨床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞傳代：

1）細胞生(sheng)長至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使(shi)之脫落，然後將懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈(chen)澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然後按 1:2 比例進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓後加入培(pei)養(yang)液終

止消化(hua)，輕輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使(shi)之脫落，然後將懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並放(fang)置於(yu)凍(dong)存管中；

4）先將細(xi)胞(bao)凍存管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移入-80℃過夜，24h 後轉入液氮中進(jin)行(xing)長期保存(cun)。使(shi)用(yong)程序

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍存處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考，具體操作步(bu)驟以隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書為(wei)主。將含有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存管在 37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後將所(suo)有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入含適量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過夜（或將(jiang)細胞懸(xuan)液加入10 cm皿中，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜）。第二天(tian)換(huan)液並檢查(zha)細胞(bao)密度(du)。

2) 細胞傳代：如果細胞密度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上清(qing)，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的(de)PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸潤所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情況(kuang)而(er)定），然(ran)後在顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大部分(fen)變圓並(bing)脫落(luo)，迅速拿(na)回(hui)操作臺，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消化(hua)。輕輕(qing)打(da)勻(yun)後裝入無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態(tai)良好(hao)時，可(ke)進(jin)行細胞(bao)凍存。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集細胞(bao)及(ji)細胞培(pei)養(yang)液，裝入無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細胞數量加入無(wu)血清(qing)細胞(bao)凍存(cun)液，使細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍存管做(zuo)好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存管放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入液氮灌(guan)儲(chu)存。記錄凍存(cun)管位置以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後首先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上(shang)述現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯系。

2. 仔細(xi)閱讀細胞說(shuo)明書，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比例、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件(jian)壹致，若由(you)於培(pei)養(yang)條件(jian)不(bu)壹致而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部分(fen)細(xi)胞由(you)於溫度(du) 變化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形成(cheng)碎片，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細胞(bao)可(ke)以消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞(bao)，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞(bao)後前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記錄細胞(bao)狀態(tai)，便(bian)於和(he)我司技術部溝通(tong) 交(jiao)流。由(you)於運輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現不(bu)穩定的(de)情況，請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯系，告知(zhi)細胞 的(de)具體情況(kuang)，以便(bian)我們(men)的(de)技術人員跟蹤回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細胞，請(qing)換(huan)用(yong)按照(zhao)說明(ming)書細胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新(xin)配制的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細胞。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後第壹次(ci)傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。

公司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

Midnolin： 中腦(nao)核(he)仁(ren)蛋白抗(kang)體 IL13RA2 Others Mouse 小鼠 IL13RA2 / CD213A2 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對照)

NSC，大(da)鼠神(shen)經幹細胞(bao) 大(da)鼠胸腺激(ji)活(huo)調(tiao)節(jie)趨化(hua)因(yin)子(zi)(TARC)ELISA試(shi)劑盒 Mouse angiotension II ,ANG- II  小鼠血(xue)管緊張素Ⅱ 96T

MYH7B： 肌(ji)球蛋白重(zhong)鏈7抗(kang)體 BALB/C小鼠肝(gan)瘤株(zhu);BNL 1ME A.7R.1

NCI-H226(人(ren)肺鱗(lin)癌細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 VERO C1008 (E6)(非(fei)洲(zhou)綠猴(hou)腎細胞) 大鼠(shu)胸腺基(ji)質(zhi)淋巴細(xi)胞(bao)生(sheng)成(cheng)素(TSLP)ELISA試(shi)劑(ji)盒 ACE II  大(da)鼠(shu)血(xue)管緊張素Ⅱ轉化(hua)酶 96T

MYOM1： 肌(ji)間(jian)蛋白1抗(kang)體 兔(tu)間(jian)變表皮(pi)鱗癌瘤株;VX2

HBQ1： 血(xue)紅蛋白theta亞型(xing)1抗(kang)體 CL-0066COLO 205(人(ren)結(jie)腸癌細胞)5×106cells/瓶(ping)×2

Y79細(xi)胞，人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞(bao)瘤 球毛殼(ke)黴 小鼠肺(fei)腺癌細胞系;LA795 人鈣(gai)調(tiao)0酸酶(CaN)ELISA 試劑盒 EGFL7(EGF-like domain containing protein 7) 類(lei)表(biao)皮(pi)生(sheng)長因(yin)子(zi)域7抗(kang)原 0.5mg

HBS1L： hbs1樣(yang)蛋白抗(kang)體 MMP2 Others Human 人(ren) MMP-2 / CLG4A 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照)

盤羊皮(pi)膚細胞;ASHS2 人(ren)鈣(gai)調(tiao)結(jie)合(he)蛋白(CALD)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Egr-1(Early growth response 1) 早(zao)期(qi)反(fan)應基(ji)因(yin)-1/應(ying)急(ji)反(fan)應生(sheng)長基(ji)因(yin)1抗(kang)原 0.5mg

HCAP G： 縮素復合(he)物(wu)亞型(xing)蛋白3抗(kang)體 EB病(bing)毒轉化(hua)的(de)人B淋巴細(xi)胞(bao)(拉(la)祜(hu)族(zu));KM9406

MCF-10A人(ren)乳腺(xian)上皮(pi)細胞PCDHGB5： 原鈣(gai)粘蛋白γB5抗(kang)體 Hs 683細(xi)胞，人(ren)腦視神(shen)經膠質(zhi)瘤細(xi)胞 人(ren)癌細胞,MDA-MB-468細胞(bao) 動(dong)物(wu)上皮(pi)細胞培(pei)養(yang)基(ji)EpiCM-a

EGF Others Mouse 小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對照) 大(da)鼠(shu)輔肌動(dong)蛋白α2(ACTN2)ELISA試(shi)劑(ji)盒 T3  大(da)鼠(shu)狀腺原酸 96T

Proteasome 20S alpha 5： 蛋白酶體PSMα5抗(kang)體 CM-H069人(ren)膀胱(guang)平滑(hua)肌細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji)100mL

NCI-H1395人(ren)肺腺(xian)癌細胞 Human lung adenocarcinoma cell line NCI-H1395 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)封閉(bi)蛋白5(CLDN5)ELISA試(shi)劑(ji)盒 HEV-IgG(Human hepatitis E virus IgG)  人(ren)戊(wu)型(xing)肝(gan)炎病毒(du)IgG 96T

PNPLA6： 含(han)patatin樣0脂(zhi)酶6抗(kang)體 LXN Others Human 人(ren) Latexin / LXN / TCI 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照)