MC3T3-E1小(xiao)鼠胚胎成(cheng)骨細(xi)胞(bao)

公(gong)司產品(pin)僅供(gong)科研研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得(de)用(yong)於臨床診斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培(pei)養

液(ye)終止消化，再(zai)輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸液轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重(zhong)懸，然(ran)後按 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入培(pei)養液(ye)終

止消化，輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸液轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放置於凍存管(guan)中；

4）先將細(xi)胞(bao)凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入-80℃過夜，24h 後轉(zhuan)入液氮(dan)中進行長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒(he)可(ke)直接放入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存處(chu)理僅供(gong)參(can)考，具(ju)體操(cao)作步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說(shuo)明書為主(zhu)。將含有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍存管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中迅速(su)搖(yao)晃解凍，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條件下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻。然(ran)後將所有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中，使消化液(ye)浸潤(run)所(suo)有細(xi)胞(bao)，將培(pei)養瓶(ping)置於37℃培(pei)養箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定），然(ran)後在顯微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終止消化。輕輕打(da)勻後裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的新(xin)皿(min)中或者瓶中，置於培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍存。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數量加(jia)入無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍存液(ye)，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管(guan)凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意凍存管(guan)做(zuo)好(hao)標識(shi)。將凍存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記錄凍存管(guan)位(wei)置以(yi)便下(xia)次拿取(qu)。

三(san)、培(pei)養註意事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養液(ye)是(shi)否(fou)有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有上(shang)述現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時和我們聯系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞(bao)形態、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條件壹(yi)致，若(ruo)由(you)於培(pei)養條件不壹(yi)致而(er)導致細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題，責任由(you) 客(ke)戶自(zi)行承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面，顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶置於 37℃培(pei)養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直接混勻收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種到新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或培(pei)養皿(min)中，置於培(pei)養箱(xiang)中進行培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相同(tong)條件的培(pei)養基(ji)用於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議客(ke)戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於和我司技術部溝(gou)通 交(jiao)流。由(you)於運(yun)輸的原因(yin)，個別敏感細(xi)胞(bao)會(hui)出現(xian)不穩(wen)定(ding)的情(qing)況，請及(ji)時和(he)我們聯系，告知細(xi)胞(bao) 的具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便我們的技(ji)術人員跟蹤(zong)回訪(fang)直至問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用的培(pei)養基(ji) (灌液培(pei)養基(ji)) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按照說(shuo)明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件新(xin)配(pei)制的培(pei)養基(ji)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。

公(gong)司正在出售的產(chan)品：

T24-EGFP(CMV-EGFP慢病(bing)毒(du)構(gou)建(jian)穩定株(zhu))人膀(pang)胱(guang)癌(ai)細(xi)胞(bao) T24-EGFP (CMV-EGFP leiviral consuct stable sain) of human bladder cancer cells 1640+10% FBS 大(da)鼠熱休(xiu)克(ke)蛋白糖(tang)蛋白96(HSP gp96)ELISA 試劑(ji)盒(he) LHRH  大(da)鼠黃(huang)體生成(cheng)素釋(shi)放激(ji)素 96T

phospho-NDEL1(Thr219)： 0酸(suan)化中心(xin)粒蛋白Nudel抗體 RTN4R Others Human 人 RTN4R / NOGOR 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照)

CM-R052大(da)鼠子宮(gong)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji)100mL 大(da)鼠熱休(xiu)克(ke)蛋白β8(HSPβ8)ELISA試劑(ji)盒(he) OSMR(human oncostatin M receptor)  人制瘤素M受(shou)體(ti) 96T

NDUFS4： 線(xian)粒體(ti)復合(he)物(wu)NDUFS4蛋白抗體 大(da)鼠嗜(shi)堿(jian)性粒(li)細(xi)胞(bao)性白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao);RBL-2H3

人腦血(xue)管(guan)平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao) (HBVSMC)( 5×105 ) 人臍動脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞(bao) MCF-7(MCF7)(ATCC來(lai)源), 人癌(ai)細(xi)胞(bao) 大(da)鼠熱休(xiu)克(ke)蛋白β6(HSPβ6)ELISA試劑(ji)盒(he) vWF(Mouse von Willebrand Factor)  小(xiao)鼠血(xue)管(guan)性血(xue)友病(bing)因(yin)子(zi)/瑞(rui)斯(si)托(tuo)輔因(yin)子(zi) 96T

phospho-IKK beta(Ser471)： 0酸(suan)化KB抑(yi)制(zhi)蛋白激(ji)酶(mei)β抗體 人成(cheng)骨肉(rou)瘤細(xi)胞(bao);MG-63

T84(人結腸(chang)腺(xian)癌(ai)肺轉(zhuan)移(yi)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠淋(lin)巴(ba)瘤細(xi)胞(bao)(NK靶(ba)細(xi)胞(bao));YAC-1 人Ⅰ型膠原C端(duan)肽(CTX-Ⅰ)ELISA 試劑(ji)盒(he) CD117/c-kit/SCFR 幹細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)受體/細(xi)胞(bao)表面分(fen)化抗原(抗原) 0.5mg

phospho-IKK beta(Ser740)： 0酸(suan)化KB抑(yi)制(zhi)蛋白激(ji)酶(mei)β抗體 海(hai)馬神經應(ying)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次方(fang)(1ml)

CSF1 Protein Mouse 重(zhong)組小(xiao)鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 (His 標(biao)簽) 人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA 試劑(ji)盒(he) CD133 造血(xue)幹細(xi)胞(bao)抗原(多(duo)肽抗原) 0.5mg

phospho-IKK beta(Ser733)： 0酸(suan)化KB抑(yi)制(zhi)蛋白激(ji)酶(mei)β抗體 PTPN12 Others Human 人 PTPN12 (aa 1-355) 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照)

MC3T3-E1小(xiao)鼠胚胎成(cheng)骨細(xi)胞(bao)PLXDC1 Others Human 人 PLXDC1 / TEM3 / TEM7 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照) 大(da)鼠白介(jie)素12A(IL12A)ELISA試劑(ji)盒(he) AFU(Human alpha-L-fucosidase)  人αL巖藻(zao)糖(tang)苷酶(mei) 96T

phospho-RGS19(Tyr143)： 0酸(suan)化G蛋白信(xin)號轉(zhuan)導(dao)調(tiao)節(jie)因(yin)子(zi)19抗體 EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化的人B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)(傣(dai)族(zu));KM9403

CL-0038BRL(大(da)鼠肝細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2 大(da)鼠白介(jie)素12(IL-12/P70)ELISA試劑(ji)盒(he) eNOS(Human Endothelial nitric oxide synthase)  人內(nei)皮型合(he)成(cheng)酶(mei) 96T

RGS19： G蛋白信(xin)號轉(zhuan)導(dao)調(tiao)節(jie)因(yin)子(zi)19抗體 DDR2 Others Human 人 DDR2 Kinase / CD167b 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照)

胎牛血(xue)清(qing)FBS 大(da)鼠白介(jie)素12(IL-12/P70)ELISA 試劑(ji)盒(he) HO-1(Human heme oxygenase 1)  人血(xue)紅素氧(yang)合(he)酶(mei)1 96T