MM.1R人多發性(xing)骨髓瘤(liu)細胞

公(gong)司產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研研究使用、不得用於臨(lin)床診斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細胞回縮變圓後加(jia)入 5ml 培(pei)養

液(ye)終止消化，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使之脫(tuo)落，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細胞用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然(ran)後按 1:2 比(bi)例(li)進行分瓶傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細胞回縮變圓後加(jia)入培(pei)養液(ye)終

止消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使之脫(tuo)落，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並(bing)放置(zhi)於凍存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移入-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液氮(dan)中進(jin)行長期保(bao)存。使用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接放入-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養操(cao)作

1) 復蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培(pei)養凍存處理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考，具(ju)體操(cao)作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書為主。將(jiang)含有1 mL細胞懸液的凍存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混合(he)均勻。在1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然後將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸液加(jia)入含適(shi)量(liang)培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養瓶中培(pei)養過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸液加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液(ye)並(bing)檢查細胞密度。

2) 細胞傳(chuan)代：如果細胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離子的PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中，使消化液浸(jin)潤所有(you)細胞，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視細胞情況而(er)定(ding)），然後在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞消化情況，若(ruo)細胞大部分變圓並(bing)脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終止消化。輕(qing)輕(qing)打勻後裝(zhuang)入無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞懸液按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新的含8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新(xin)皿中或(huo)者瓶中，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細胞凍存：待(dai)細胞生長狀(zhuang)態良好(hao)時，可進行細胞凍存。下面(mian) T25 瓶為例(li)；a、收集(ji)細胞及細胞培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄盡(jin)PBS，進行細胞計(ji)數(shu)。

b、根據細胞數量(liang)加(jia)入無血(xue)清(qing)細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每(mei)支(zhi)凍存管(guan)凍存1mL細胞懸液，註(zhu)意(yi)凍存管(guan)做(zuo)好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲存。記錄(lu)凍存管(guan)位(wei)置(zhi)以便(bian)下(xia)次拿(na)取(qu)。

公(gong)司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

NCI-H596(人肺腺鱗(lin)癌細胞) 5×106cells/瓶×2 cv-1(非洲(zhou)綠(lv)猴(hou)腎(shen)細胞) 大鼠(shu)腺苷(gan)A1受體(ADORA1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) MMP-3 (Rabbit matrix metalloproteinase 3)  兔子(zi)基(ji)質金屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶3 96T

MIF： 巨(ju)噬(shi)細胞移動(dong)抑(yi)制因子抗體 中(zhong)國倉鼠(shu)卵巢(chao)細胞(亞(ya)系(xi)克(ke)隆(long));CHO Hu 164 SCF 17

IL36A Protein Human 重組人 IL1F6 / IL36 蛋(dan)白 (aa 6-158) 大鼠(shu)腺病(bing)毒抗體(FL/K87-Ab)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) pACCase  大鼠(shu)0酸化乙酰羧(suo)化酶 96T

CCL3： 巨(ju)噬(shi)細胞炎癥(zheng)因子(zi)1α抗體 ATF2 Others Human 人 ATF2 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆(kun)蟲(chong)細胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照)

大鼠(shu)角膜成(cheng)纖(xian)維細胞培(pei)養基(ji) 100mL 大鼠(shu)線粒體乙(yi)脫(tuo)氫(qing)酶(ALDM)ELISA試劑(ji)盒(he) sCD30(Mouse soluble cluster of differentiation 30)  小(xiao)鼠(shu)可溶(rong)性(xing)CD30 96T

HDAC2： 組(zu)蛋(dan)白去(qu)乙酰化酶2抗體 EB病(bing)毒轉(zhuan)化的人B淋巴(ba)細胞;Mao

MDA-MB-435S(人導管(guan)癌細胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠(shu) PD1 / PDCD1 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照) 人多形(xing)核白細胞彈性(xing)蛋白酶(PMN Elastase)ELISA 試劑(ji)盒(he) GAD-67 (glutamate decarboxylase 67) 谷酸脫(tuo)羧(suo)酶-67抗原(yuan) 0.5mg

large S protein： 人Large S蛋(dan)白抗(kang)體 成(cheng)纖(xian)維細胞生長添加(jia)物(wu)(不含動(dong)物(wu)成分(fen))FGS-acf

FAM19A4 Protein Human 重組人 FAM19A4 / TAFA4 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽) 人多效(xiao)生(sheng)長因子(zi)(PTN)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) GADD153(Growth arrest and DNA damage-inducible 153) 生長(chang)抑(yi)制DNA損傷基(ji)因(yin)153抗(kang)原(yuan) 0.5mg

ErbB 4： HER4抗(kang)體 F7 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) Coagulation Factor VII / FVII / F7 CHO細胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照)

MM.1R人多發性(xing)骨髓瘤(liu)細胞人肺細胞;HLF-a 人胰(yi)腺上(shang)皮細胞培(pei)養基(ji) 100mL 大鼠(shu)二0酸腺苷(gan)(ADP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) PDGFsR- Alpha  大鼠(shu)血小(xiao)板(ban)衍(yan)生(sheng)生長因子(zi)可(ke)溶(rong)性(xing)受體α 96T

phospho-PYK2 (Tyr402)： 0酸化富(fu)含脯(pu)酸的酪酸激酶2抗體 原(yuan)代腎(shen)實質細胞特制基礎培(pei)養基(ji)Many types of cells包裝(zhuang)：500/250/100ml

THPO Protein Human 重組人 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋(dan)白 (His 標(biao)簽) 大鼠(shu)二價(jia)金屬(shu)轉(zhuan)運蛋白(bai)1(DMT1)ELISA試劑(ji)盒(he) NT-4  大鼠(shu)神經(jing)營養(yang)因(yin)子4 96T

phospho-PYK2 (Tyr881)： 0酸化富(fu)含脯(pu)酸的酪酸激酶2抗體 TMUB2 Others Human 人 TMUB2 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照)

MuM-2C 人眼(yan)脈絡(luo)黑色(se)素瘤(liu)細胞 大鼠(shu)二價(jia)金屬(shu)離(li)子(zi)轉(zhuan)運體(DMT1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) PS-2(Human Presenilin 2)  人早(zao)老(lao)素2 96T

三(san)、培(pei)養註(zhu)意(yi)事項 

1. 收(shou)到細胞後首(shou)先(xian)觀(guan)察細胞瓶是否(fou)完好(hao)，培(pei)養液(ye)是否(fou)有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述現象(xiang) 發生(sheng)請及時和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞說(shuo)明(ming)書，了(le)解(jie)細胞相關(guan)信息，如細胞形(xing)態、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所需(xu) 細胞因子等，確(que)保(bao)細胞培(pei)養條(tiao)件壹致(zhi)，若由(you)於培(pei)養條(tiao)件不壹致(zhi)而導致(zhi)細胞出(chu)現(xian)問題，責任(ren)由 客(ke)戶自(zi)行承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦拭(shi)細胞瓶表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞狀(zhuang)態。因(yin)運輸問題，部分細胞由於溫(wen)度(du) 變化及劇(ju)烈碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮(fu)細胞直(zhi)接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)重懸 細胞，並(bing)接種到(dao)新的(de)培(pei)養瓶或培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培(pei)養。

5. 請客戶用相同條(tiao)件的培(pei)養基(ji)用(yong)於細胞培(pei)養。

6. 建(jian)議客戶(hu)收到細胞後前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張細胞照片，記錄細胞狀(zhuang)態，便(bian)於和我司(si)技(ji)術(shu)部溝通 交(jiao)流(liu)。由於運輸的原(yuan)因，個別敏感細胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩定(ding)的(de)情況，請及時和我們(men)聯(lian)系，告(gao)知細胞 的具(ju)體情況，以便(bian)我(wo)們(men)的(de)技(ji)術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問題解(jie)決。

7. 該(gai)細胞僅供科(ke)研使用。

8. 備註(zhu)：運輸用的培(pei)養基(ji) (灌(guan)液(ye)培(pei)養基(ji)) 不能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養細胞，請換(huan)用(yong)按照說(shuo)明(ming)書細胞培(pei) 養條(tiao)件新配(pei)制的培(pei)養基(ji)來(lai)培(pei)養細胞。     收到細胞後第(di)壹次傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。