HCT116人結(jie)腸(chang)癌(ai)細胞(bao)

公司產品(pin)僅(jin)供科研研究(jiu)使用、不得(de)用於(yu)臨床診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕輕吹打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落，然後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈澱細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後按 1:2 比(bi)例進(jin)行分瓶傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

壹、商品(pin)介(jie)紹：

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落，然後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並放(fang)置於凍(dong)存(cun)管中；

4）先將細胞凍(dong)存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行長期(qi)保(bao)存。使用程(cheng)序

降(jiang)溫盒可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步驟以隨(sui)貨產品(pin)說明(ming)書為主。將含有1 mL細胞懸(xuan)液的(de)凍存(cun)管在(zai) 37℃水浴中迅(xun)速(su)搖晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合均勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹勻。然後將所(suo)有細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液(ye)並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即可進(jin)行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上清(qing)，用不含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所(suo)有細胞，將培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況(kuang)而(er)定），然後在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞消(xiao)化情況(kuang)，若細胞大部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落，迅(xun)速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。輕輕打勻後裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將細胞懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例分(fen)到新的含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時(shi)，可進(jin)行細胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為例；a、收(shou)集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡PBS，進(jin)行細胞(bao)計數(shu)。

b、根據(ju)細胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍存(cun)液，使細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每支凍存管凍(dong)存1mL細胞懸(xuan)液，註(zhu)意凍(dong)存管做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存管位(wei)置以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司正在(zai)出售(shou)的產品(pin)：

MLL5： 髓(sui)系/淋巴混(hun)合譜(pu)系白血(xue)病(bing)蛋(dan)白5抗體(ti) DKK1 Others Rhesus 恒河(he)猴(hou) DKK-1 / Dkk1 人細胞裂解液 (陽性(xing)對(dui)照)

3T3-L1, 小鼠前(qian)脂肪細(xi)胞(bao) 大鼠血(xue)管內(nei)皮生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)受體3(VEGFR3)ELISA試劑(ji)盒(he) F1+2 (Rabbit prothrombin fragment 1+2)  兔原(yuan)片(pian)段(duan)F1+2 96T

MPV17： T淋巴細(xi)胞(bao)成熟(shu)相關蛋白抗體(ti) T739小鼠肺(fei)腺(xian)癌(ai)瘤(liu)株(zhu);LA795

NCI-H1688(人典型(xing)小細胞(bao)肺癌(ai)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 3T6-Swiss albino(胚胎(tai)成纖(xian)維細(xi)胞(bao)) 大(da)鼠血(xue)管內(nei)皮生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)受體2(VEGFR2)ELISA試劑(ji)盒(he) Ricinus communis agglutinin,RCA  蓖麻凝(ning)集素 96T

cblA： 甲基(ji)尿(niao)癥cblA抗體 瘤(liu)牛皮膚(fu)細胞(bao);BIN-S1

HIP55/DBNL： 宮頸(jing)黏(nian)液蛋(dan)白相關(guan)蛋白抗體(ti) 水貂肺上皮細(xi)胞;Mv.1.Lu(NBL-7) T淋(lin)巴細(xi)胞(bao)白血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)，Jurkat,Clone E6-1細(xi)胞(bao) MPC-83細胞，小鼠胰(yi)腺(xian)腺(xian)泡細胞(bao)癌(ai)細胞(bao)

RK2 Others Rat 大鼠 kB / RK2 人細胞裂解液 (陽性(xing)對(dui)照) 人孤腓肽(OFQ/N)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Cyclin A 周(zhou)期(qi)素(su)A抗原 0.5mg

H3N8 hemagglutinin： 流感(gan)病(bing)毒H3N8血(xue)凝(ning)素抗體 CL-0122HUVEC(HUV-EC-C) (人臍(qi)靜(jing)脈血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞)5×106cells/瓶×2

UM細胞，人葡(pu)萄(tao)膜黑色素細胞(bao) 土曲黴(mei) 人胃癌(ai)細胞(bao);MKN-45 人鉤端螺旋體抗(kang)體(Lep-Ab)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Cyclin B1 周(zhou)期(qi)素(su)B1抗原 0.5mg

H3N7 hemagglutinin： 流感(gan)病(bing)毒H3N7血(xue)凝(ning)素抗體 COCH Others Human 人 COCH / Cochlin ( isoform short ) 人細胞裂解液 (陽性(xing)對(dui)照)

HCT116人結(jie)腸(chang)癌(ai)細胞(bao)人胚肝二倍體細胞;CCC-HEL-1 人支氣管上皮細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠肝(gan)表達趨(qu)化(hua)因子(LEC)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) ET-1  大鼠(shu)內(nei)皮素(su)1 96T

PTCHD3： 修(xiu)補相(xiang)關(guan)蛋白PTCHD3抗體(ti) 人顱骨成(cheng)骨細(xi)胞(bao)HCO

MDK Protein Human 重(zhong)組人 Midkine / MDK 蛋白 大鼠(shu)肝癌(ai)源性(xing)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)(HDGF)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Human paramyxovirus parotitis IgG  人腮腺(xian)炎(yan)病(bing)毒IgG 96T

PKMYT1： 髓(sui)鞘轉(zhuan)錄因(yin)子1激酶抗體 ANGPTL7 Others Canine 狗 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 人細胞裂解液 (陽性(xing)對(dui)照)

MDA-MB-435S 人導管癌(ai)細胞(bao) 大(da)鼠(shu)肝(gan)X受體β(LXRβ)ELISA試劑(ji)盒(he) BK  大鼠(shu)血(xue)管舒(shu)緩激肽 96T

三(san)、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞後首先觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是否(fou)有漏液、渾濁等現(xian)象(xiang)，若有上述現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請及(ji)時和(he)我們(men)聯系。

2. 仔細閱讀細胞(bao)說明(ming)書，了解細胞相(xiang)關信息，如(ru)細(xi)胞形態、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例、所(suo)需 細胞(bao)因(yin)子等，確(que)保細胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由於培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細胞(bao)出現(xian)問(wen)題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自行承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細胞瓶表面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態。因運(yun)輸問題，部分細(xi)胞(bao)由(you)於溫度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰亡破碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶壁(bi)將 T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可以消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並接(jie)種到新的培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到細胞後前 3 天(tian)各(ge)拍幾張細(xi)胞照片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態，便(bian)於和(he)我司技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交流。由(you)於運(yun)輸的原因，個別(bie)敏(min)感(gan)細胞會出現(xian)不穩(wen)定的情況(kuang)，請及(ji)時和(he)我們(men)聯系，告知細胞 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的技(ji)術人員跟蹤回訪直(zhi)至(zhi)問題(ti)解(jie)決。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供科研使用。

8. 備註：運(yun)輸用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按(an)照說明(ming)書細胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細胞後第(di)壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。