143B細胞(bao)

公(gong)司產(chan)品僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不(bu)得用於(yu)臨床(chuang)診斷！

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中的(de)培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培(pei)養

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使之脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然後按(an) 1:2 比例進行分瓶傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

壹、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中的(de)培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入培(pei)養液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化，輕輕吹打細(xi)胞(bao)使之脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並(bing)放(fang)置於(yu)凍存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將細胞(bao)凍存(cun)管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移入(ru)-80℃過夜，24h 後轉(zhuan)入液(ye)氮中(zhong)進行長(chang)期保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序

降溫盒(he)可直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處(chu)理僅供參考(kao)，具(ju)體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以隨(sui)貨產(chan)品說明書為(wei)主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速搖(yao)晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件下離(li)心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻(yun)。然後將所有細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養瓶中培(pei)養過(guo)夜（或(huo)將細胞(bao)懸液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜）。第(di)二天換(huan)液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上(shang)清，用不(bu)含(han)鈣、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所(suo)有細(xi)胞(bao)，將培(pei)養瓶置於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而定(ding)），然(ran)後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞(bao)消化(hua)情況，若(ruo)細胞(bao)大部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。輕輕打勻(yun)後裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹勻(yun)。

c、將細胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比例分到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶中，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行細胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集(ji)細胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管中，1000 rpm條件下離(li)心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細胞(bao)計數。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數量(liang)加入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意凍存(cun)管(guan)做好標識(shi)。將凍存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置以便下次拿(na)取。

公(gong)司正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品：

細(xi)胞(bao)脊髓(sui)過氧(yang)化酶(mei)（MPO）活性(xing)高(gao)質敏感（DTNB）比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

花生(sheng)四(si)烯酸(suan)代(dai)謝(xie)產(chan)物高(gao)效(xiao)液(ye)相色(se)譜(pu)檢測試(shi)劑(ji)專(zhuan)題

通(tong)用型HSV（HERPES SIMPLX）病(bing)毒(du)定(ding)量(liang)PCR擴(kuo)增(zeng)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

細(xi)胞(bao)CASPASE-3蛋白(bai)表(biao)達流(liu)式細(xi)胞(bao)儀檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

肉(rou)類氟元素(su)比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

免疫(yi)細(xi)胞(bao)化學HRP酶(mei)聯DAB間接檢測試(shi)劑(ji)盒(he)（含(han)壹抗(kang)和HRP二(er)抗(kang)）

細(xi)胞(bao)RSK3激(ji)酶(mei)活性(xing)定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)（A/B/C）

冰(bing)凍切(qie)片(pian)組(zu)織(zhi)衰老(lao)特(te)異性(xing)脂褐素(su)靛(dian)酚原位(wei)染色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)

酵(jiao)母(mu)甘(gan)肽(tai)過氧(yang)化物酶（GSH PX）活性(xing)酶動力比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

細(xi)胞(bao)中鏈(lian)脂酰脫氫酶（ACYL COA DEHYDROGENASE）活性(xing)比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

冰(bing)凍切(qie)片(pian)組(zu)織(zhi)氧(yang)化酶(mei)表(biao)達免疫(yi)組(zu)織(zhi)化學檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

吸者(zhe)人(ren)體肺(fei)組織(zhi)微(wei)粒(li)體組(zu)分(fen)（5毫(hao)克(ke)/毫(hao)升）

細(xi)胞(bao)線粒(li)體復(fu)合(he)物II蛋白(bai)表(biao)達流(liu)式細(xi)胞(bao)儀檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

體液(ye)組織(zhi)L（CATHEPSIN L）活性(xing)比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

RPMI 1640細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji)

原鈣粘(zhan)蛋白(bai)γB6抗(kang)體

鈣5抗(kang)體

羥(qiang)類固醇脫氫酶(mei)17β-HSD抗(kang)體

hUPF2蛋白(bai)抗(kang)體

細(xi)胞(bao)表面(mian)樣轉(zhuan)錄(lu)因(yin)子2重(zhong)組(zu)兔(tu)單克(ke)隆抗(kang)體

UBX結(jie)構(gou)域(yu)域蛋白(bai)D2抗(kang)體

科(ke)凱(kai)恩(en)氏綜(zong)合(he)癥相關(guan)蛋白(bai)/早(zao)衰(shuai)蛋白(bai)CSA抗(kang)體

143B細胞(bao)APC-Cy7標記人CD45RO單克(ke)隆抗(kang)體

鋅指蛋白(bai)645抗(kang)體

三(san)、培(pei)養註(zhu)意事項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞(bao)瓶是否(fou)完(wan)好，培(pei)養液(ye)是否(fou)有漏液(ye)、渾濁等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞(bao)說明書，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如細胞(bao)形態、所用培(pei)養基(ji)、血清(qing)比例、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因子(zi)等(deng)，確(que)保細胞(bao)培(pei)養條件壹致，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養條件不(bu)壹致而導致細胞(bao)出(chu)現(xian)問題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶自行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀(zhuang)態。因運(yun)輸問題，部分細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度(du) 變化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可以消化(hua)，懸浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接混勻(yun)收集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)重懸 細胞(bao)，並(bing)接種到新的(de)培(pei)養瓶或培(pei)養皿(min)中，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中進(jin)行培(pei)養。

5. 請(qing)客戶(hu)用相同條件的(de)培(pei)養基(ji)用於(yu)細胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術部溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸的(de)原因(yin)，個別(bie)敏(min)感細胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩定(ding)的(de)情況，請(qing)及時和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情(qing)況，以便我(wo)們(men)的(de)技(ji)術人員(yuan)跟蹤(zong)回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供科研(yan)使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培(pei)養基(ji) (灌(guan)液(ye)培(pei)養基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請(qing)換用按(an)照(zhao)說明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件新配制(zhi)的(de)培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細胞(bao)後第(di)壹次傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。