ATN-1細胞(bao)

公司產(chan)品僅(jin)供科研研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次；

2）添加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微(wei)鏡下觀(guan)察，待細胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消化，再(zai)輕輕吹(chui)打細胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將懸液轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上清，沈澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次；

2）添加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微(wei)鏡下觀(guan)察，待細胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加入培(pei)養(yang)液終

止消化，輕(qing)輕吹(chui)打細胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將懸液轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並放置於凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將細胞(bao)凍(dong)存(cun)管放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移入-80℃過夜，24h 後(hou)轉入液氮中(zhong)進行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存。使用程(cheng)序

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直接(jie)放入-80℃。

二、細胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅(jin)供參考，具體操作步(bu)驟以隨貨(huo)產(chan)品說明書(shu)為主。將含有1 mL細胞(bao)懸液(ye)的凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴中迅速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均勻。在1000 rpm條件下離心(xin)3 min，棄去(qu)上清液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將所有(you)細胞(bao)懸液(ye)加入含適量(liang)培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜（或將細胞(bao)懸液(ye)加入10 cm皿中，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜）。第(di)二天換液(ye)並(bing)檢查細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使消化液(ye)浸潤所有(you)細胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡下觀(guan)察細胞(bao)消化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大(da)部分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅速拿回操作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消化。輕(qing)輕打勻後(hou)裝入無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻。

c、將細胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例分(fen)到新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新皿(min)中或者(zhe)瓶中(zhong)，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生長(chang)狀態(tai)良(liang)好時，可進行(xing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)4 min，棄去(qu)上清液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細胞(bao)計數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數量(liang)加入無血清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標(biao)識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置以便下次(ci)拿取。

公(gong)司正在出售的產(chan)品：

細(xi)胞(bao)壹氧化(hua)氮合(he)成(cheng)酶總活(huo)性(xing)熒光(guang)定(ding)量檢測試(shi)劑盒(he)

細(xi)胞(bao)可溶性(xing)總核(he)蛋(dan)白制(zhi)備(bei)試(shi)劑盒(he)

通(tong)用型VZV（VARICELLA ZOSTER）病(bing)毒(du)定(ding)性檢測試(shi)劑盒(he)

CASPASE-4蛋(dan)白表達(da)ELISA定(ding)量檢測試(shi)劑盒(he)

B1比(bi)色法定(ding)量檢測試(shi)劑盒(he)

冰(bing)凍(dong)切(qie)片(pian)免(mian)疫組織(zhi)化(hua)學AP酶聯(lian)NBT/BCIP間(jian)接(jie)檢測試(shi)劑盒(he)

組織(zhi)BTK激酶活性定(ding)量檢測試(shi)劑盒(he)（A/B/C）

冰(bing)凍(dong)切(qie)片(pian)組織(zhi)衰(shuai)老(lao)特(te)異(yi)性早(zao)期(qi)脂(zhi)褐素油性(xing)紅原(yuan)位(wei)染色試(shi)劑盒(he)

總抗(kang)氧化(hua)能(neng)力(li)（TAC）終(zhong)點(dian)比(bi)色法定(ding)量檢測試(shi)劑盒(he)

細(xi)胞(bao)磷脂(zhi)酶A2（Phospholipase A2）活(huo)性比(bi)色法定(ding)量檢測試(shi)劑盒(he)

性(xing)染色體分(fen)離（percoll法）試(shi)劑盒(he)

體外(wai)非(fei)細(xi)胞(bao)系統(tong)細(xi)胞(bao)色素P450亞(ya)酶CYP2C（AMD）活(huo)性

線(xian)粒體復(fu)合(he)物(wu)III蛋(dan)白表達(da)ELISA定(ding)量檢測試(shi)劑盒(he)

細(xi)胞(bao)血管緊(jin)張(zhang)素Ⅰ轉化酶（ACE）總活(huo)性(xing)熒光(guang)定(ding)量檢測試(shi)劑盒(he)

通(tong)用型細胞(bao)培(pei)養(yang)汙染性(xing)支原(yuan)體屬(shu)鑒定(ding)16S rDNA

原(yuan)鈣粘附蛋白β10抗(kang)體

鈣(gai)結合(he)蛋(dan)白1抗(kang)體

鞘(qiao)氨(an)醇(chun)激酶1抗(kang)體

INE1蛋(dan)白抗(kang)體

細(xi)胞(bao)雕亡(wang)敏感(gan)性基因(yin)抗(kang)體

VWCE抗(kang)體

克(ke)侖(lun)特(te)羅(luo)/瘦(shou)肉(rou)精(jing)抗(kang)體

ATN-1細胞(bao)APC標記人(ren)CD11a單(dan)克(ke)隆抗(kang)體

鋅(xin)指蛋白680抗(kang)體

三、培(pei)養(yang)註意事項 

1. 收(shou)到細胞(bao)後(hou)首先(xian)觀(guan)察細胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液是否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現象，若(ruo)有上述現象 發生(sheng)請及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細胞(bao)說明書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相關(guan)信息，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用培(pei)養(yang)基、血(xue)清比(bi)例、所需(xu) 細胞(bao)因子(zi)等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件壹致，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條件不(bu)壹致而(er)導(dao)致細胞(bao)出現問(wen)題，責(ze)任由(you) 客戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶表面，顯微(wei)鏡下觀(guan)察細胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎形(xing)成碎(sui)片，是正常(chang)現象。觀(guan)察好細(xi)胞(bao)狀態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可以(yi)消化，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接(jie)混(hun)勻收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新的(de)培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客戶(hu)用相同條件的(de)培(pei)養(yang)基用於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到細胞(bao)後(hou)前 3 天各拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照片，記錄(lu)細胞(bao)狀態(tai)，便(bian)於和我(wo)司技(ji)術部溝通(tong) 交流。由(you)於運輸的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不(bu)穩定(ding)的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們的(de)技(ji)術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供科研使用。

8. 備註：運輸用的培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液培(pei)養(yang)基) 不(bu)能(neng)再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請換用按(an)照說明書(shu)細胞(bao)培(pei) 養(yang)條件新配制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後(hou)第(di)壹次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。