BEL7404細胞(bao)

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得用於臨床診斷！

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中，倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後加入 5ml 培養

液(ye)終止消(xiao)化，再(zai)輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培養基(ji)重懸，然後按 1:2 比(bi)例(li)進行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養箱中培(pei)養；

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中，倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後加入培養液(ye)終

止消(xiao)化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於凍存管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細胞(bao)凍存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入-80℃過夜，24h 後轉入液氮(dan)中進行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用程序(xu)

降溫盒(he)可直接放(fang)入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養操(cao)作

1) 復蘇細胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培養凍(dong)存處(chu)理僅(jin)供(gong)參考，具體(ti)操作步驟(zhou)以(yi)隨貨產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)為主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃解凍，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混合均勻。在(zai)1000 rpm條件下離(li)心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹(chui)勻。然後將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入含適量培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過夜（或將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入10 cm皿中，加(jia)入約8 mL培(pei)養基(ji)，培養過夜）。第二(er)天換液(ye)並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進行傳(chuan)代(dai)培養。

a、棄(qi)去培(pei)養上(shang)清，用不含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤洗細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培養瓶(ping)置於37℃培養箱中消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而(er)定(ding)），然後在(zai)顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養基(ji)終止消(xiao)化。輕輕打勻後裝入無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培養液(ye)後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到新的含8 mL培養基(ji)的新皿中或者瓶(ping)中，置於培養箱中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可進行細胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集細(xi)胞(bao)及細胞(bao)培養液(ye)，裝入無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下離(li)心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數(shu)量加(jia)入無血(xue)清(qing)細胞(bao)凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記錄凍存(cun)管(guan)位置以(yi)便下次(ci)拿(na)取。

公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

血(xue)液(ye)誘(you)導型(xing)巨(ju)噬(shi)細胞(bao)壹氧(yang)化氮(dan)合成(cheng)酶(mei)（（iNOS /NOS2/mNOS））活(huo)性比(bi)色(se)法定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

植物組(zu)織(zhi)可溶(rong)性(xing)親水總(zong)蛋(dan)白制備(bei)試(shi)劑(ji)盒

細胞(bao)CMV（CYTOMEGALOVIRUS）病毒(du)定(ding)性(xing)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

細胞(bao)CASPASE-8蛋(dan)白表達(da)比(bi)色(se)法定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

B2高效液相色(se)譜法(fa)定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

TEM電鏡冰(bing)凍(dong)切片免疫組織(zhi)化學(xue)HRP酶(mei)聯DAB直接檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

組織(zhi)CLK1激酶(mei)活(huo)性定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒（A/B/C）

細胞(bao)衰老(lao)特(te)異(yi)性(xing)晚(wan)期(qi)脂褐(he)素(su)高碘(dian)酸希爾(er)（PAS）法

組織(zhi)肪(fang)酸(suan)酶(mei)連續(xu)循環比(bi)色(se)法定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

脂肪(fang)氧(yang)化酶(mei)（lipoxygenase）活(huo)性比(bi)色(se)法定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

細胞(bao)核蛋(dan)白核堿(jian)性(xing)蛋(dan)白（nuclear basic protein）萃取試(shi)劑(ji)盒

體(ti)外非細胞(bao)系(xi)統細(xi)胞(bao)色(se)素(su)P450亞酶(mei)CYP2A（COD）活(huo)性

線粒體(ti)復合物IV蛋(dan)白表達(da)西方雜(za)交(jiao)分(fen)析試(shi)劑(ji)盒

血(xue)液(ye)血(xue)管(guan)緊張(zhang)素(su)Ⅰ轉化酶(mei)1（ACE1）活(huo)性熒(ying)光定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

細胞(bao)脂質生成(cheng)比(bi)色(se)法定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

原始(shi)廣泛存在(zai)蛋(dan)白1抗(kang)體(ti)

鈣結(jie)合蛋(dan)白重組兔(tu)單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)

親核素(su)β1抗(kang)體(ti)

INTS4蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

細胞(bao)毒(du)顆(ke)粒(li)相關蛋(dan)白TIA-1抗(kang)體(ti)

WDR35蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

口蹄疫病毒(du)VP1抗(kang)體(ti)

BEL7404細胞(bao)APC標(biao)記人(ren)CD158d (KIR2DL4)單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)

鋅指蛋(dan)白693抗(kang)體(ti)

三(san)、培養註意(yi)事(shi)項 

1. 收到細(xi)胞(bao)後首先(xian)觀察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養液(ye)是否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生請及時和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書，了解細胞(bao)相關信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用培養基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因子(zi)等(deng)，確(que)保細胞(bao)培養條件壹致，若(ruo)由於培養條件不(bu)壹致而導致細胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自(zi)行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部分(fen)細(xi)胞(bao)由於溫度 變化及劇烈碰亡破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可以(yi)消(xiao)化，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直接混勻收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮的培(pei)養基(ji)重懸 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新的培(pei)養瓶(ping)或培養皿(min)中，置於培養箱中進行培養。

5. 請客(ke)戶(hu)用相同條件的培(pei)養基(ji)用於細胞(bao)培養。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後前 3 天各拍(pai)幾張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記錄細胞(bao)狀態(tai)，便於和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由於運(yun)輸(shu)的原因，個(ge)別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不(bu)穩定(ding)的情況，請及時和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細胞(bao) 的具(ju)體(ti)情況，以(yi)便我(wo)們(men)的技術(shu)人員跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直至問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用的培(pei)養基(ji) (灌(guan)液(ye)培養基(ji)) 不能再用來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按照(zhao)說明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培 養條件新配(pei)制(zhi)的培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後第壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。