C2BBe1細胞

公(gong)司(si)產品(pin)僅供科研研究使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床診斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液，用(yong) PBS 清洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液約 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上清，沈澱細胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

壹、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液，用(yong) PBS 清洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液約 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放置(zhi)於凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞凍(dong)存(cun)管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移入-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮中(zhong)進行(xing)長(chang)期保存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二、細胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇細胞：以(yi)下(xia)細胞培(pei)養凍存(cun)處理(li)僅供參考，具(ju)體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨貨產品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細胞懸(xuan)液的凍存(cun)管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃解凍，加4 mL培(pei)養基混合(he)均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件下(xia)離心(xin)3 min，棄去上清液，加1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所有(you)細胞懸(xuan)液加入含適量(liang)培(pei)養基的培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或將(jiang)細胞懸(xuan)液加入10 cm皿中(zhong)，加入約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜）。第二天(tian)換(huan)液並檢查細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代：如果(guo)細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄去培(pei)養上清，用(yong)不(bu)含鈣、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中(zhong)，使(shi)消化液浸潤(run)所有(you)細胞，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況而定(ding)），然後(hou)在顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消(xiao)化情(qing)況，若細胞大部分變圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻後(hou)裝(zhuang)入無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養基的新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)，置於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待細胞生(sheng)長(chang)狀態良好時(shi)，可進(jin)行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集細胞及(ji)細胞培(pei)養液，裝入無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離心(xin)4 min，棄去上清液，用(yong)PBS清洗壹遍，棄盡PBS，進(jin)行(xing)細胞計數。

b、根據(ju)細胞數量(liang)加入無血(xue)清細胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支凍存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標識。將(jiang)凍存(cun)管放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售的產品(pin)：

細胞氧(yang)化酶(mei)活(huo)性熒光定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

溫和(he)包涵(han)體蛋(dan)白溶(rong)解試劑(ji)盒(he)

組(zu)織HPV7（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-7）病(bing)毒定(ding)性(xing)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

載玻(bo)片細胞CASPASE-10蛋白(bai)表達(da)NBT顯色光學顯微(wei)鏡檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

組(zu)織總氨基酸含量(liang)比(bi)色法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

TEM電鏡石(shi)蠟(la)切(qie)片免疫(yi)組(zu)織化學HRP酶聯(lian)DAB間接檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)（含HRP二抗(kang)）

細胞FGFR4激酶(mei)活(huo)性定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)（A/B/C）

動(dong)物細胞周期G0期同步（SYNCHRONY）處理(li)試劑(ji)盒(he)

E標準(zhun)溶(rong)液

組(zu)織胰腺脂(zhi)酶(mei)活(huo)性比(bi)色法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

活(huo)力(li)熒光染色試劑(ji)盒(he)

細胞色素P450亞(ya)酶(mei)1A2（PHENACETIN）活(huo)性高(gao)效液相(xiang)色譜(pu)法(fa)（HPLC）定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

石蠟(la)切(qie)片組(zu)織鈣ATP酶PMCA蛋白(bai)表達(da)NBT顯色光學顯微(wei)鏡檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

體液人類巨細胞病(bing)毒（HCMV PROTEASE）活(huo)性熒光淬滅(mie)法(fa)

小鼠(shu)胚(pei)胎成(cheng)纖維(wei)細胞（MEF）培(pei)養基

載脂(zhi)蛋白(bai)A2抗(kang)體(ti)

鈣調(tiao)蛋(dan)白(bai)依(yi)賴(lai)性(xing)蛋(dan)白(bai)激酶(mei)磷酸(suan)酶抗(kang)體(ti)

氫鉀(jia)ATP酶通道(dao)蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

IRGQ蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

細胞分裂周期37樣蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體(ti)

WW結構(gou)域(yu)E3泛素連(lian)接(jie)酶1抗(kang)體(ti)

跨膜(mo)蛋(dan)白(bai)147抗(kang)體(ti)

C2BBe1細胞APC標記人CD33單(dan)克隆抗(kang)體(ti)

鋅指蛋白737抗(kang)體(ti)

三(san)、培(pei)養註(zhu)意(yi)事項 

1. 收(shou)到(dao)細胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察(cha)細胞瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養液是否(fou)有(you)漏(lou)液、渾濁等(deng)現(xian)象，若有(you)上述(shu)現象 發生請及(ji)時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱(yue)讀細胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細胞相(xiang)關信息(xi)，如細胞形(xing)態、所用(yong)培(pei)養基、血(xue)清比(bi)例(li)、所需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保細胞培(pei)養條件壹致(zhi)，若由(you)於培(pei)養條件不壹致(zhi)而導(dao)致細胞出現(xian)問題(ti)，責任由 客戶(hu)自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀(zhuang)態。因(yin)運輸(shu)問題(ti)，部(bu)分細胞由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精(jing)消毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可(ke)以消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混勻(yun)收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養基重懸(xuan) 細胞，並(bing)接種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養瓶或培(pei)養皿中(zhong)，置於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培(pei)養。

5. 請客戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件的培(pei)養基用(yong)於(yu)細胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞照片(pian)，記錄細胞狀(zhuang)態，便於和(he)我司(si)技術部溝通 交流。由於運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏(min)感細胞會(hui)出現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情況，請(qing)及時和(he)我們聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體情(qing)況，以(yi)便我們的技術人員跟蹤回(hui)訪直(zhi)至問題(ti)解決。

7. 該(gai)細胞僅供科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養基 (灌液培(pei)養基) 不能再用(yong)來培(pei)養細胞，請(qing)換用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細胞培(pei) 養條件新配制的(de)培(pei)養基來培(pei)養細胞。     收(shou)到(dao)細胞後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。