C2C12,P12(fromGeXinjie)細(xi)胞(bao)

公(gong)司產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸液轉移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然後(hou)按(an) 1:2 比例進(jin)行分瓶(ping)傳(chuan)代，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

壹、商品(pin)介(jie)紹：

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru)培(pei)養液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸液轉移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放置於(yu)凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存(cun)管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮中進(jin)行長期保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒可直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存(cun)處理(li)僅供(gong)參考(kao)，具體(ti)操(cao)作步驟(zhou)以隨貨產(chan)品(pin)說明書為主。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液的凍存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃解凍，加4 mL培(pei)養基(ji)混合(he)均勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻。然後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜）。第(di)二(er)天換(huan)液並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如果(guo)細(xi)胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而定），然後(hou)在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅速(su)拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕輕(qing)打(da)勻後裝(zhuang)入(ru)無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比例分(fen)到新的含8 mL培(pei)養基(ji)的新皿(min)中或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生長狀態(tai)良好時(shi)，可進(jin)行細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝入(ru)無菌離心管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數量(liang)加入(ru)無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍存(cun)管放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮灌儲存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位置(zhi)以便下次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

組織(zhi)氧(yang)化(hua)酶(mei)活性(xing)熒光定量(liang)檢測試劑(ji)盒

包(bao)涵體蛋白溶解(jie)試(shi)劑(ji)盒

體(ti)液HPV7（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-7）病(bing)毒定性檢(jian)測試劑(ji)盒

冰(bing)凍切(qie)片組織(zhi)CASPASE-10蛋白表達(da)NBT顯(xian)色(se)光學(xue)顯微鏡(jing)檢(jian)測試劑(ji)盒

血(xue)液總氨基(ji)酸含(han)量(liang)比色法(fa)定量(liang)檢測試劑(ji)盒

TEM電(dian)鏡石(shi)蠟(la)切(qie)片免疫組織(zhi)化(hua)學HRP酶(mei)聯(lian)DAB間接(jie)檢測試劑(ji)盒

組織(zhi)FGFR4激(ji)酶(mei)活性(xing)定量(liang)檢測試劑(ji)盒（A/B/C）

動(dong)物細(xi)胞(bao)周(zhou)期G1早(zao)期同(tong)步（SYNCHRONY）處理(li)試劑(ji)盒

人(ren)血液(ye)載脂蛋白A1（APOLIPOPROTEIN A1）免(mian)疫比濁(zhuo)法(fa)定量(liang)檢測試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)肝(gan)脂酶(mei)活性(xing)比色法(fa)定量(liang)檢測試劑(ji)盒

活(huo)力伊(yi)紅(hong)苯(ben)胺(an)黑(hei)（eosin－nigrosin）染色(se)試(shi)劑(ji)盒

體(ti)外非細(xi)胞(bao)系(xi)統細(xi)胞(bao)色素P450亞(ya)酶(mei)1A2（PHENACETIN）活(huo)性(xing)

細(xi)胞(bao)鈣ATP酶(mei)PMCA蛋白表達(da)比色法(fa)定量(liang)檢測試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)冠狀病(bing)毒3C類(lei)（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性(xing)

胚胎幹(gan)細(xi)胞(bao)培(pei)養生長因子

載(zai)脂蛋白A4抗(kang)體(ti)

鈣(gai)調節蛋白-1抗(kang)體(ti)

氫(qing)離子電(dian)壓門(men)控通道(dao)蛋白1抗(kang)體(ti)

Iroquois同(tong)源(yuan)蛋白1抗(kang)體(ti)

細(xi)胞(bao)分裂周(zhou)期蛋白14B抗(kang)體(ti)

XAB2蛋白抗體(ti)

跨(kua)膜蛋白158抗(kang)體(ti)

C2C12,P12(fromGeXinjie)細(xi)胞(bao)APC標(biao)記人(ren)CD36單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)

鋅(xin)指蛋白738抗體(ti)

三、培(pei)養註(zhu)意(yi)事項 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好，培(pei)養液(ye)是否有漏液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述現象(xiang) 發生請及時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明書，了(le)解細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基(ji)、血清比例、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子等(deng)，確(que)保細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現問題，責任(ren)由(you) 客戶自(zi)行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因運輸(shu)問(wen)題，部分細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎形(xing)成(cheng)碎片，是正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培(pei)養基(ji)重懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培(pei)養。

5. 請客戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於和我(wo)司技術部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於運輸(shu)的原因(yin)，個別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現不穩(wen)定的情況，請及時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具體情(qing)況，以便我(wo)們(men)的技術人員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直(zhi)至問(wen)題解決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養基(ji) (灌液培(pei)養基(ji)) 不能再(zai)用(yong)來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用(yong)按(an)照說明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件(jian)新配(pei)制的培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後第壹次(ci)傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。