C3A(HepG2/C3A)細(xi)胞

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液終止消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例(li)進行分瓶(ping)傳代(dai)，最後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

壹(yi)、商品(pin)介紹(shao)：

2、細(xi)胞凍存：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入(ru)培養液終

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍存管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進行長(chang)期保存。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降溫盒(he)可(ke)直接(jie)放入-80℃。

二、細(xi)胞培養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培養凍存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參(can)考，具體(ti)操(cao)作步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明書為(wei)主。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸液的凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培養基混(hun)合(he)均勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培養基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有細(xi)胞懸液加入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或將細(xi)胞懸液加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜）。第(di)二天換液(ye)並檢(jian)查細(xi)胞密度。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去(qu)培養上(shang)清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸潤(run)所有細(xi)胞，將培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而(er)定），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大部(bu)分(fen)變(bian)圓並脫落(luo)，迅(xun)速拿回(hui)操作臺，輕(qing)敲幾下(xia)培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基終止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後(hou)裝入無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培養液後(hou)吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸液按1:2比例(li)分(fen)到新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養基的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞凍存：待細(xi)胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時，可(ke)進行細(xi)胞凍存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集(ji)細(xi)胞及細(xi)胞培養液，裝入無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞計數。

b、根(gen)據細(xi)胞數量(liang)加(jia)入無血清(qing)細(xi)胞凍存液，使(shi)細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支凍存管凍存1mL細(xi)胞懸液，註意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存管放入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌儲存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位置(zhi)以(yi)便下(xia)次拿(na)取。

公(gong)司(si)正在出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

細(xi)胞單胺氧(yang)化(hua)酶(mei)（MAO）總活性比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

可(ke)溶性包(bao)涵體(ti)蛋白(bai)復性（化(hua)學稀(xi)釋(shi)II）試(shi)劑(ji)盒(he)

細(xi)胞HPV7（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-7）病(bing)毒定量(liang)PCR

細(xi)胞CASPASE-10蛋白(bai)表達(da)比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

植(zhi)物(wu)總氨基(ji)酸(suan)含(han)量(liang)比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

TEM電(dian)鏡(jing)石(shi)蠟(la)切(qie)片免(mian)疫組(zu)織(zhi)化(hua)學AP酶(mei)聯(lian)NBT/BCIP基(ji)礎(chu)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

組(zu)織(zhi)FGR激酶(mei)活性定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)（A/B/C）

動物細(xi)胞周期G1後(hou)期同(tong)步（SYNCHRONY）處(chu)理試劑(ji)盒(he)

人血液(ye)載(zai)脂蛋白(bai)B（APOLIPOPROTEIN B）免疫比濁(zhuo)法定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

細(xi)胞脂蛋白(bai)脂酶(mei)活性比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

頂體形態花(hua)生凝集(ji)素熒光標記(ji)（PNA-FITC）染(ran)色試(shi)劑(ji)盒(he)

細(xi)胞色素(su)P450亞(ya)酶(mei)2A6（COUMARIN）活性高效(xiao)液(ye)相色譜(pu)法（HPLC）定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

鈣(gai)ATP酶(mei)PMCA蛋白(bai)表達(da)西(xi)方雜交分(fen)析試(shi)劑(ji)盒(he)

組(zu)織(zhi)冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒3C類（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性

胚胎(tai)幹(gan)細(xi)胞補充培養基

載(zai)脂蛋白(bai)AI調節蛋白(bai)1抗體

鈣(gai)調(tiao)節素/鈣(gai)調(tiao)蛋白(bai)/鈣調素抗體

氫(qing)離子(zi)轉運ATP合(he)成(cheng)酶(mei)A1抗體

Iroquois同(tong)源蛋白(bai)5抗體

細(xi)胞分裂周期蛋白(bai)20B抗體

XRN1單克隆抗體

跨(kua)膜蛋白(bai)166抗體

C3A(HepG2/C3A)細(xi)胞APC標記(ji)人CD3單克隆抗體

鋅(xin)指(zhi)蛋白(bai)741抗體

三、培(pei)養註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞後(hou)首先觀察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培養液是(shi)否有漏液、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發生(sheng)請及(ji)時和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書，了解細(xi)胞相關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞形態、所(suo)用(yong)培養基、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保細(xi)胞培養條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由於培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現問(wen)題，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題，部分(fen)細(xi)胞由於溫(wen)度 變(bian)化(hua)及劇烈碰亡破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正常現象(xiang)。觀察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可(ke)以(yi)消化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞直接混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的培(pei)養基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並接(jie)種到新(xin)的(de)培養瓶(ping)或培(pei)養皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行培養。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養基用(yong)於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天各拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我司(si)技術(shu)部(bu)溝通 交(jiao)流(liu)。由於運輸的原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏(min)感細(xi)胞會(hui)出(chu)現不(bu)穩(wen)定的情(qing)況(kuang)，請及(ji)時和我們(men)聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的具體情(qing)況(kuang)，以(yi)便我們(men)的技術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用的(de)培(pei)養基 (灌液培養基) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來培養細(xi)胞，請換(huan)用(yong)按照(zhao)說(shuo)明書細(xi)胞培 養條(tiao)件(jian)新配(pei)制(zhi)的(de)培養基來培養細(xi)胞。     收到細(xi)胞後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。