CCD-1069Sk細胞

公司(si)產(chan)品僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床診斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回縮變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進行分(fen)瓶傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

壹、商品介(jie)紹(shao)：

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回縮變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放置於(yu)凍存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細胞凍存(cun)管(guan)放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中(zhong)進行長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使用程序

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直接(jie)放入-80℃。

二、細胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞：以下細胞培(pei)養(yang)凍存(cun)處理僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟以隨貨(huo)產(chan)品說明(ming)書為主。將(jiang)含(han)有1 mL細胞懸(xuan)液的(de)凍存(cun)管(guan)在 37℃水浴中迅速搖晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培養(yang)基混合(he)均勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液加入含(han)適量培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將細胞懸(xuan)液加入10 cm皿中，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天(tian)換液並檢查細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代：如果(guo)細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進行傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況而(er)定(ding)），然後(hou)在顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情況，若細胞大部分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕敲幾下(xia)培養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打勻(yun)後(hou)裝入無菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分(fen)到新的(de)含(han)8 mL培養(yang)基的(de)新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進行細胞凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集(ji)細胞及細胞培(pei)養(yang)液，裝入無菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄盡PBS，進行細胞計(ji)數(shu)。

b、根據細胞數(shu)量(liang)加入無血清細胞凍存(cun)液，使細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註意(yi)凍存(cun)管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將凍存(cun)管(guan)放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管(guan)位(wei)置以便下(xia)次(ci)拿(na)取。

公司(si)正(zheng)在出(chu)售的(de)產(chan)品：

體(ti)液單(dan)胺(an)氧化(hua)酶(mei)（MAO）總(zong)活性(xing)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

蛋白體復合(he)物制備(bei)試(shi)劑(ji)盒(he)

組(zu)織KSHV（KAPOSI SARCOMA-ASSOCIATED HERPESVIRUS）病(bing)毒(du)定(ding)量(liang)PCR擴(kuo)增檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

石(shi)蠟切(qie)片(pian)組織(zhi)MYC蛋白表(biao)達(da)NBT顯(xian)色(se)光(guang)學顯(xian)微鏡檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

細胞遊(you)離氨(an)基酸(suan)含(han)量熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

酶(mei)聯(lian)免疫檢(jian)測(ce)（EIA）分(fen)析試(shi)劑(ji)專(zhuan)題(ti)

細胞乙(yi)酰(xian)酯(zhi)酶(mei)活性(xing)熒(ying)光(guang)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

細胞氧(yang)化(hua)應激活性(xing)氧(yang)（ROS）魯(lu)米諾(nuo)化(hua)學(xue)發(fa)光(guang)法(fa)

細胞色(se)素P450亞(ya)酶(mei)2D6（DEXTROMETHORPHAN）活性(xing)

細胞鈣(gai)ATP酶(mei)SERCA蛋白表(biao)達(da)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

細胞基質金(jin)屬(shu)抑(yi)制劑(ji)1（TIMP-1）活性(xing)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

基質膠體(ti)法(fa)大鼠(shu)胚(pei)胎(tai)幹細胞繁(fan)殖試(shi)劑(ji)盒(he)

載(zai)脂(zhi)蛋白D抗(kang)體

鈣(gai)網(wang)蛋白抗體

丘(qiu)腦(nao)分(fen)泌素(su)受(shou)體(ti)2抗(kang)體

IZUMO1蛋白抗體

細胞分(fen)裂周(zhou)期(qi)蛋白5樣(yang)蛋白抗體

X染(ran)色(se)體開放閱(yue)讀框23抗(kang)體

跨膜蛋白18抗(kang)體

CCD-1069Sk細胞APC標(biao)記(ji)人(ren)CD58單(dan)克隆(long)抗體(ti)

鋅指(zhi)蛋白764抗體

三、培養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察(cha)細胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好，培養(yang)液是否有漏(lou)液、渾濁等(deng)現象，若有上(shang)述現象 發(fa)生請(qing)及時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細閱(yue)讀細胞說明(ming)書，了(le)解細胞相(xiang)關信(xin)息，如(ru)細胞形(xing)態、所(suo)用培(pei)養(yang)基、血清比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細胞培(pei)養(yang)條(tiao)件壹(yi)致，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件不(bu)壹致(zhi)而(er)導(dao)致細胞出(chu)現問題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部分(fen)細胞由(you)於(yu)溫度 變化(hua)及劇(ju)烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎形(xing)成碎片(pian)，是正(zheng)常現象。觀(guan)察好細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞直(zhi)接(jie)混勻收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基重懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中進行培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用相(xiang)同(tong)條(tiao)件的(de)培養(yang)基用於(yu)細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議客戶收到細胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍幾張(zhang)細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和我(wo)司技(ji)術(shu)部溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏感細胞會(hui)出(chu)現不(bu)穩定(ding)的(de)情況，請及時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體(ti)情況，以便我(wo)們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員跟蹤(zong)回訪直(zhi)至(zhi)問題(ti)解決。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用的(de)培養(yang)基 (灌(guan)液培養(yang)基) 不能再(zai)用來培養(yang)細胞，請(qing)換用按照說明(ming)書細胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件新(xin)配制的(de)培養(yang)基來培養(yang)細胞。     收(shou)到細胞後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。