SNU-1033細(xi)胞(bao)

公(gong)司產品僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床診斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養瓶(ping)中，倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入 5ml 培養

液終(zhong)止消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然(ran)後按(an) 1:2 比例進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養瓶(ping)中，倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入培養液終(zhong)

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍存(cun)管中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存(cun)管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液氮(dan)中進行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使用程序(xu)降溫(wen)盒(he)可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處理(li)僅供(gong)參(can)考(kao)，具體(ti)操(cao)作(zuo)步驟以隨(sui)貨(huo)產品說(shuo)明(ming)書為主。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的凍存(cun)管在(zai) 37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加4 mL培(pei)養基(ji)混合均勻。在(zai)1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基(ji)後吹(chui)勻。然後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入含適(shi)量(liang)培(pei)養基(ji)的培養瓶(ping)中培(pei)養過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養基(ji)，培養過(guo)夜(ye)）。第(di)二天換液並(bing)檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代(dai)培養。

a、棄去培養上清，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況(kuang)而定），然(ran)後在(zai)顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部分變(bian)圓並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲幾下培(pei)養瓶(ping)後加2-3ml培養基(ji)終(zhong)止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上清液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比例分到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養基(ji)的新皿(min)中或者瓶中，置(zhi)於(yu)培養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態良好時，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去上清液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄盡PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加入無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍存(cun)液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意凍存(cun)管做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管放入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入液氮(dan)灌儲存(cun)。記錄凍存(cun)管位置以便下次(ci)拿(na)取(qu)。

三(san)、培(pei)養註(zhu)意事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好(hao)，培(pei)養液是(shi)否(fou)有漏(lou)液、渾濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上述現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血清比例、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子(zi)等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養條(tiao)件不(bu)壹致而導致細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶(hu)自行承(cheng)擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運(yun)輸問(wen)題(ti)，部(bu)分細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰亡破(po)碎形成碎片，是(shi)正常現象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精(jing)消毒瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養基(ji)重懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種到(dao)新的(de)培養瓶(ping)或培(pei)養皿(min)中，置(zhi)於(yu)培養箱中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件(jian)的培(pei)養基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後前 3 天各拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照片，記錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便於和(he)我(wo)司技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由於(yu)運(yun)輸的(de)原(yuan)因，個別敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不(bu)穩定的(de)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的(de)具體(ti)情況(kuang)，以便(bian)我(wo)們的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪直至問題(ti)解決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸用的(de)培(pei)養基(ji) (灌液培養基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來培養細(xi)胞(bao)，請(qing)換用按(an)照說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配(pei)制的培(pei)養基(ji)來培養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後第壹次(ci)傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。

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大(da)鼠層粘(zhan)連(lian)蛋(dan)白(bai)(LN)ELISA試(shi)劑盒(he) ，英(ying)文(wen)名(ming)： LN ELISA Kit

RatCrosslaps,CrELISAKit大(da)鼠骨(gu)膠原(yuan)交聯(Cr)ELISA試(shi)劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

Mouse macrophage colony stimulating factor (M-CSF) ELISA Kit 小(xiao)鼠巨(ju)噬細(xi)胞(bao)集(ji)落刺激因子(zi)(M-CSF)ELISA試(shi)劑盒(he)

MouseThioredoxin,xELISAKit 小(xiao)鼠硫氧(yang)化(hua)還(hai)原蛋白(bai)(x)ELISA試(shi)劑盒(he) 96T/48T 進口(kou)分裝(zhuang)

CLIAKitforHumanP27proteinELISAKit人(ren)P27蛋(dan)白(bai)規格(ge)：48T/96T

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人(ren)皮(pi)膚(fu)T細(xi)胞(bao)虜(lu)獲趨(qu)化(hua)因子(zi)(CTACK/CCL27)ELISA 試(shi)劑盒(he) 96T/48T 試(shi)劑盒(he) 組(zu)裝(zhuang)/原(yuan)裝(zhuang)

小(xiao)鼠細(xi)胞(bao)周(zhou)期素D2(Cyclin-D2)免疫(yi)試(shi)劑盒(he) Mouse Cyclin-D2 ELISA Kit

甲型副(fu)沙門(men)氏(shi)菌(jun)(SPA)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)(PCR-熒光探針(zhen)法(fa)) 48T

HumansecretoryimmunoglobulinA,SIgAELISA試(shi)劑盒(he)人(ren)分泌(mi)型(xing)A(SIgA)ELISA試(shi)劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

乳品乙(yi)酸激酶(mei)法定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)20次(ci)

ELISAKitKAF人(ren)角(jiao)化(hua)細(xi)胞(bao)內(nei)分泌(mi)因子(zi)規格(ge)：48T/96T

大(da)鼠血栓前體蛋白(bai)(TpP)ELISA 試(shi)劑盒(he) 96T/48T 試(shi)劑盒(he) 組(zu)裝(zhuang)/原(yuan)裝(zhuang)

人(ren)纖(xian)溶抑(yi)制因子(zi)/激活的纖(xian)溶抑(yi)制物(TAFI)免疫(yi)試(shi)劑盒(he) Human TAFI ELISA Kit

銅藍(lan)蛋(dan)白(bai)含(han)量測試(shi)盒(he) 可見分光光度法 50管(guan)/24樣(yang)

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C單(dan)克(ke)隆(long)抗體（包(bao)被）

乳糖酶(mei)根皮(pi)苷(gan)水(shui)解酶(mei)1抗體

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磷酸化(hua)Rho GTP酶(mei)激活蛋白(bai)GAP抗體

SNU-1033細(xi)胞(bao)CDC42效(xiao)應蛋(dan)白(bai)3抗體

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