SNU-1041細胞(bao)

公司產品僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷！

壹(yi)、商品介紹：

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養

液(ye)終止消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比例(li)進行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入培(pei)養液(ye)終

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於凍(dong)存(cun)管中；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放置於-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入液(ye)氮(dan)中進行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)降溫盒可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培(pei)養凍(dong)存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產品說(shuo)明書為主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴(yu)中迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹勻。然後(hou)將(jiang)所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過(guo)夜（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜）。第二天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤所有(you)細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情況(kuang)而定），然後(hou)在顯微鏡下(xia)觀察細胞消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿回操作臺，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝入無菌離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例(li)分(fen)到新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的新皿(min)中或者(zhe)瓶(ping)中，置於培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進行(xing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞及(ji)細胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細胞數量(liang)加(jia)入無血(xue)清細(xi)胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管做好(hao)標識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管位置以(yi)便(bian)下(xia)次拿取。

三、培(pei)養註意(yi)事項 

1. 收(shou)到細(xi)胞後(hou)首先觀察細胞瓶是(shi)否完好(hao)，培(pei)養液(ye)是(shi)否有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述現(xian)象 發生請及(ji)時和(he)我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信息(xi)，如細胞(bao)形(xing)態(tai)、所用(yong)培(pei)養基(ji)、血(xue)清比(bi)例(li)、所需(xu) 細(xi)胞因子等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現問題，責任(ren)由 客(ke)戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦拭細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀察細胞狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸問(wen)題，部分(fen)細胞(bao)由於溫度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡破(po)碎(sui)形成碎片(pian)，是(shi)正常現象。觀察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消毒瓶壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞直接混勻收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新的培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中，置於培(pei)養箱(xiang)中進行(xing)培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件的培(pei)養基(ji)用(yong)於細胞(bao)培(pei)養。

6. 建議客(ke)戶收(shou)到細(xi)胞後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍幾張細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流。由於運(yun)輸的原因，個別敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會出現不穩定(ding)的情況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我們(men)聯系(xi)，告(gao)知細(xi)胞 的具體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技(ji)術(shu)人員跟(gen)蹤回訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅(jin)供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用(yong)的培(pei)養基(ji) (灌(guan)液培(pei)養基(ji)) 不(bu)能(neng)再用(yong)來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按照(zhao)說(shuo)明書細胞培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

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