SNU-175細胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供科(ke)研研究使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨床(chuang)診斷！

壹、商品(pin)介(jie)紹(shao)：

1、細胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分瓶傳(chuan)代，最後放入 37℃，5%CO2細胞(bao)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並放(fang)置於(yu)凍存管(guan)中；

4）先(xian)將細胞(bao)凍存(cun)管(guan)放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後轉入液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用程序(xu)降(jiang)溫(wen)盒(he)可直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理(li)僅(jin)供參考，具體操作步(bu)驟以隨貨產(chan)品說明書(shu)為(wei)主。將含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅(xun)速(su)搖晃解凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然後(hou)將所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含(han)適(shi)量培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果細胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況(kuang)而定(ding)），然後(hou)在(zai)顯微鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若細胞(bao)大部(bu)分變圓(yuan)並(bing)脫落，迅速(su)拿(na)回操作臺(tai)，輕(qing)敲幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例分到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數(shu)量加(jia)入無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支凍存管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做好(hao)標識(shi)。將凍存管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲存。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置以(yi)便下(xia)次拿(na)取(qu)。

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細胞(bao)說明書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相關信息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態、所(suo)用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例、所(suo)需 細胞(bao)因子等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹致，若由於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹致而導(dao)致細胞(bao)出現(xian)問題(ti)，責任由 客戶自(zi)行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭細胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部(bu)分細胞(bao)由於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰亡(wang)破碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁細胞(bao)可以(yi)消化，懸(xuan)浮細胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並接(jie)種到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養(yang)基用於(yu)細胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議客戶收(shou)到(dao)細胞(bao)後前 3 天各拍幾張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我(wo)司(si)技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由於(yu)運(yun)輸(shu)的原因(yin)，個別(bie)敏感細胞(bao)會出(chu)現不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯系，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的具體情況(kuang)，以便我(wo)們(men)的技術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至問題(ti)解(jie)決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研使(shi)用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用的培(pei)養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養(yang)基) 不(bu)能(neng)再(zai)用來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用按照(zhao)說明書(shu)細胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新配制的培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後第(di)壹次傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的(de)產品：

細(xi)胞(bao)樣品(pin)亞細胞(bao)結構(gou)分離(li)試(shi)劑盒(he)10次(ci)

CLIAKitforC-PeptideC-肽(tai)(夾心(xin)法二(er)步(bu)法)規(gui)格：48T/96T

RatcrosslinkedN-telopeptideoftypeⅠcollagen,XELISAKit大(da)鼠(shu)Ⅰ型膠(jiao)原(yuan)N末端(duan)肽(X)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

大(da)鼠(shu)補體受體2(CR2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ，英文名： CR2 ELISA Kit

Rat laminin / laminin (LN) ELISA Kit 大(da)鼠(shu)層連蛋(dan)白/板(ban)層素(LN)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

humanserumamyloidA3,SAA3ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)人3(SAA3)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

ELISAKitASD小(xiao)鼠(shu)雄(xiong)烯二(er)同(tong)規(gui)格：48T/96T

Humancarbonicanhydrase2，CA-2ELISAKit人酶(mei)2(CA-2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

人Ⅲ(FⅢ)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) 96T/48T 試(shi)劑(ji)盒(he) 組(zu)裝(zhuang)/原(yuan)裝(zhuang)

小(xiao)鼠(shu)細(xi)胞(bao)間粘附(fu)分子3(ICAM-3/CD50)免(mian)疫(yi)試(shi)劑(ji)盒(he) Mouse iercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISA Kit

植(zhi)物(wu)原(yuan)測(ce)試盒(he) 可(ke)見(jian)分光光度(du)法 50管(guan)/24樣(yang)

RatneuropeptideY,NP-YELISA試(shi)劑(ji)盒(he)大鼠(shu)神經(jing)肽(tai)Y(NP-Y)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

HumanHighdensitylipoprotein,HDLELISA試(shi)劑(ji)盒(he)人高密(mi)度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(HDL)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

HumanLysozyme，LZMELISAKit人(LZM)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

大(da)鼠(shu)血(xue)紅(hong)素氧合酶2(HO-2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ，英文名： HO-2 ELISA Kit

腫瘤(liu)抑(yi)制基因(yin)ABI2/精酪(lao)蛋(dan)白激酶結合蛋(dan)白抗體

果糖1，6-二(er)磷(lin)酸(suan)酯(zhi)酶(mei)抗體

乳腺(xian)癌(ai)抗雌激素耐藥蛋(dan)白1

MYH7B兔(tu)單(dan)克(ke)隆抗體

線粒(li)體(ti)核(he)糖(tang)體(ti)蛋(dan)白L23抗體

白(bai)細(xi)胞(bao)抗原B相(xiang)關轉(zhuan)錄蛋(dan)白5抗體

磷(lin)酸(suan)化src原(yuan)癌(ai)基因(yin)抗體

SNU-175細胞(bao)CES1P1蛋(dan)白抗體

亞鐵(tie)氧化酶抗體