TE-11細(xi)胞(bao)

公司(si)產品僅供(gong)科(ke)研(yan)研究使用、不(bu)得用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

壹(yi)、商(shang)品介紹：

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比例進行分(fen)瓶(ping)傳代，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入培(pei)養(yang)液終

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)中進行長(chang)期(qi)保存(cun)。使用程(cheng)序降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培養(yang)凍(dong)存(cun)處理(li)僅供(gong)參考，具(ju)體操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產品說(shuo)明書為主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍存(cun)管在 37℃水浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去上清液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入含(han)適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養過(guo)夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如果(guo)細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳代培養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上清，用不(bu)含(han)鈣、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在顯微鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝入無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上清液，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比例分(fen)到新(xin)的(de)含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態良(liang)好時，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收集細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝入無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去上清液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進行細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據細(xi)胞(bao)數量加(jia)入無(wu)血清細(xi)胞(bao)凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標(biao)識。將凍存(cun)管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管位(wei)置以(yi)便(bian)下次拿(na)取(qu)。

三、培(pei)養註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先觀察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完好，培養液(ye)是否有漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象，若有上述現象 發生(sheng)請及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息，如細(xi)胞(bao)形態、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血清比例、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確保細(xi)胞(bao)培養(yang)條(tiao)件(jian)壹致，若由於培(pei)養(yang)條件(jian)不壹(yi)致而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題，責任由(you) 客戶(hu)自行承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由於溫(wen)度 變化(hua)及(ji)劇烈碰亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎片，是(shi)正常現象。觀察好細(xi)胞(bao)狀態後(hou)，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培養皿(min)中(zhong)，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行培(pei)養。

5. 請客戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件(jian)的培(pei)養(yang)基(ji)用於細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建(jian)議客戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀態，便(bian)於和(he)我(wo)司技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由於運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現不穩定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們的(de)技術人員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至問(wen)題解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用的(de)培(pei)養基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按(an)照(zhao)說(shuo)明書細(xi)胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件(jian)新配制(zhi)的(de)培(pei)養基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹(yi)次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。

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