TUHR4TKB細(xi)胞

公(gong)司(si)產品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不得用(yong)於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

1、細(xi)胞傳代：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止消化，再輕輕吹(chui)打細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸，然後按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶傳代，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)後加入培(pei)養(yang)液(ye)終

止消化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍(dong)存管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液(ye)氮中(zhong)進(jin)行(xing)長(chang)期(qi)保存。使用(yong)程(cheng)序降溫盒(he)可直接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理(li)僅(jin)供參考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步(bu)驟以隨(sui)貨產品說明(ming)書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後將所有細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)含適量培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並檢查(zha)細(xi)胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳代：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中(zhong)，使消化液(ye)浸潤所(suo)有細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況而定(ding)），然後在顯微(wei)鏡下觀察(cha)細(xi)胞消化情(qing)況，若細(xi)胞大(da)部(bu)分變圓(yuan)並脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾下培養(yang)瓶後加2-3ml培養(yang)基(ji)終止消化。輕輕打勻(yun)後裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新皿中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進(jin)行(xing)細(xi)胞凍(dong)存。下面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞凍(dong)存液(ye)，使細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿(na)取(qu)。

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞後首先(xian)觀(guan)察細(xi)胞瓶是否(fou)完(wan)好，培養(yang)液(ye)是否(fou)有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象，若有上述(shu)現象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯系。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說明(ming)書，了解細(xi)胞相(xiang)關信息(xi)，如細(xi)胞形(xing)態(tai)、所用(yong)培養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所需 細(xi)胞因(yin)子等，確保細(xi)胞培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養(yang)條(tiao)件(jian)不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任由 客(ke)戶自(zi)行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細(xi)胞瓶表(biao)面，顯微(wei)鏡下觀察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分細(xi)胞由於(yu)溫度(du) 變化及劇烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎形(xing)成碎(sui)片，是正常現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可以消化，懸浮細(xi)胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培養(yang)基(ji)重懸 細(xi)胞，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建議客(ke)戶收到細(xi)胞後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運輸的(de)原因(yin)，個(ge)別敏感(gan)細(xi)胞會出(chu)現(xian)不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況，請及時(shi)和(he)我們(men)聯系，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具體情(qing)況，以便(bian)我們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能再用來(lai)培養(yang)細(xi)胞，請(qing)換(huan)用按照說明(ming)書細(xi)胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來培養(yang)細(xi)胞。     收到細(xi)胞後第壹次(ci)傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。

公司正在出(chu)售的(de)產品：

MouseorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISAKit 小(xiao)鼠孤(gu)腓(fei)肽(tai)(OFQ/N)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) 96T/48T 進(jin)口(kou)分(fen)裝

Mouse macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit 小(xiao)鼠巨(ju)噬細(xi)胞炎性(xing)蛋白(bai)1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

CLIAKitforHumanorosomucoid,ORMELISAKit人(ren)類粘蛋白(bai)規(gui)格：48T/96T

同(tong)位素(酶(mei)切產物)蛋(dan)白(bai)結(jie)合DNA酶(mei)足(zu)跡(ji)法分析(xi)試劑盒(he)10次(ci)

ELISAKitG-CSF大(da)鼠(shu)粒細(xi)胞集(ji)落(luo)刺激因(yin)子規(gui)格：48T/96T

小(xiao)鼠絲轉肽(tai)酶(mei)抑(yi)制劑Kazal type 3(SPINK3)免(mian)疫(yi)試劑(ji)盒(he) Mouse Serine Peptidase Inhibitor Kazal Type 3,SPINK3 ELISA Kit

蝦(xia)特定(ding)基因(yin)序列(lie)(FC)檢測試劑(ji)盒(he)(PCR-熒(ying)光(guang)探(tan)針法) 48T

HumanSomalcellderivedfactor1a,SDF-1aELISA試(shi)劑(ji)盒(he)人(ren)基質(zhi)細(xi)胞衍生因(yin)子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

ELISAKitCCL24小(xiao)鼠嗜酸(suan)粒細(xi)胞趨(qu)化蛋白(bai)Eotaxin2規(gui)格：48T/96T

HumanBcellactivationfactorrfromthetumornecrosisfactorfamilyreceptor,BAFF-RELISAKit人(ren)B細(xi)胞活(huo)化因(yin)子受體(BAFF-R)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

大(da)鼠(shu)血管(guan)緊張(zhang)素轉化酶(mei)(ACE)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ，英(ying)文名： ACE ELISA Kit

人(ren)鉤端IgM(Lebtospira)ELISA檢測試劑(ji)盒(he)HumanLebtospiraIgMELISAKit 96T/48T

大(da)鼠(shu)Coronin-1A(Coro1a/Coro1)免(mian)疫(yi)試劑(ji)盒(he) Rat Coronin-1A,Coro1a/Coro1 ELISA kit

CLIAKitforsFAS/Apo-1(RatsolubleFactor-relatedApoptosis,sFAS/Apo-1)ELISAKit大(da)鼠(shu)可溶性(xing)雕(diao)亡相(xiang)關因(yin)子規(gui)格：48T/96T

素釣(diao)餌(er)(PULLDOWN)檢測試劑(ji)盒(he)5次(ci)

周(zhou)期(qi)素T2抗體

含錨(mao)蛋白(bai)重(zhong)復序(xu)列(lie)-細(xi)胞因(yin)子信號抑(yi)制物盒(he)蛋(dan)白(bai)家(jia)族17抗體

三(san)磷酸(suan)腺苷結(jie)合轉運蛋(dan)白(bai)G超家(jia)族(zu)成員(yuan)2重(zhong)組(zu)兔(tu)單克隆抗體

NDUFB6蛋(dan)白(bai)抗體

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野生型(xing)P53腫瘤抑(yi)制(zhi)基(ji)因(yin)抗體