TYK-nu細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅供科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得(de)用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培養(yang)瓶的 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微鏡下觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入 5ml 培養(yang)

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再輕輕吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例進(jin)行分瓶傳(chuan)代，最後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培養(yang)瓶的 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微鏡下觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入培養(yang)液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量的(de)凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍存管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉入液氮中進(jin)行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用程序降溫盒(he)可(ke)直接(jie)放入-80℃。

壹、商品介紹：

二(er)、細(xi)胞(bao)培養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培養(yang)凍存處理僅供參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均勻。在1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將所有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)含(han)適量培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶中培養(yang)過夜（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜）。第(di)二(er)天(tian)換液並(bing)檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將培養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微鏡下觀察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿回(hui)操作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾下培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例分到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿中或者瓶中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行細(xi)胞(bao)凍存。下面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加入無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍存液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍存管(guan)凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意凍存管(guan)做好標(biao)識(shi)。將凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入液氮灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍存管(guan)位置(zhi)以(yi)便下次拿取。

三、培養(yang)註意事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首先觀察細(xi)胞(bao)瓶是否(fou)完好，培養(yang)液(ye)是否(fou)有漏液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現象，若(ruo)有上述現(xian)象 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態、所用培養(yang)基(ji)、血清(qing)比例、所需 細(xi)胞(bao)因子等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培養(yang)條(tiao)件壹致，若(ruo)由(you)於培養(yang)條(tiao)件不(bu)壹致而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出現問(wen)題，責(ze)任由(you) 客戶自(zi)行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面，顯微鏡下觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細(xi)胞(bao)由(you)於溫度(du) 變化及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是正常現(xian)象。觀(guan)察好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒瓶壁將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可(ke)以消(xiao)化，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混(hun)勻收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種到新(xin)的培養(yang)瓶或培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行培養(yang)。

5. 請(qing)客戶用(yong)相同條(tiao)件(jian)的(de)培養(yang)基(ji)用於細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建議客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天各拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於運(yun)輸(shu)的(de)原因，個別(bie)敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩定(ding)的(de)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情況(kuang)，以便我(wo)們(men)的技(ji)術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至問題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培養(yang)基(ji) (灌液培養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再用(yong)來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按照說明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正在出售的(de)產(chan)品(pin)：

Mouse macrophage inflammatory protein 1 beta (MIP-1 beta /CCL4) ELISA Kit 小鼠(shu)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)炎(yan)性(xing)蛋(dan)白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑(ji)盒

大鼠(shu)白細(xi)胞(bao)介素(su)4(IL-4)ELISA試劑(ji)盒 ，英文名(ming)： IL-4 ELISA Kit

MouseApolipoproteinE,Apo-EELISAKit 小(xiao)鼠(shu)載脂(zhi)蛋(dan)白E(Apo-E)ELISA試劑(ji)盒 96T/48T 進(jin)口分裝(zhuang)

CLIAKitforhumanorosomucoid2,ORM2ELISAKit人類粘(zhan)蛋(dan)白2規(gui)格：48T/96T

同位素(su)(酶切(qie)產(chan)物(wu))蛋(dan)白結(jie)合(he)甲基(ji)化幹(gan)擾(rao)足跡法(fa)分析(xi)試劑(ji)盒10次

人(ren)E(IgE)ELISA 試劑(ji)盒 96T/48T 試劑(ji)盒 組(zu)裝(zhuang)/原裝(zhuang)

小鼠(shu)水(shui)通(tong)道(dao)蛋(dan)白9(AQP-9)免(mian)疫試劑(ji)盒 Mouse Aquaporin 9,AQP-9 ELISA Kit

蝦(xia)特定(ding)基(ji)因序列(FC)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒 48T

HumanSomalcellderivedfactor1β,SDF-1βELISA試劑(ji)盒人基(ji)質細(xi)胞(bao)衍(yan)生(sheng)因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA試劑(ji)盒規(gui)格：96T/48T

ELISAKitCCL11小(xiao)鼠(shu)嗜(shi)酸(suan)粒細(xi)胞(bao)趨(qu)化(hua)蛋(dan)白Eotaxin1規(gui)格：48T/96T

ELISAKitMethylase人(ren)甲(jia)基(ji)化酶規(gui)格：48T/96T

大(da)鼠(shu)血管(guan)緊(jin)張(zhang)素(su)轉(zhuan)化(hua)酶(ACE)ELISA 試劑(ji)盒 96T/48T 試劑(ji)盒 組(zu)裝(zhuang)/原裝(zhuang)

人細(xi)胞(bao)色(se)素(su)b561(cytb561)免(mian)疫試劑(ji)盒 human cytb561 ELISA Kit

NO含(han)量測試盒(he) 可(ke)見(jian)分光(guang)光(guang)度(du)法(fa) 50管(guan)/24樣

RatOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISA試劑(ji)盒大鼠(shu)骨(gu)鈣(gai)素(su)/骨谷蛋(dan)白(OT/BGP)ELISA試劑(ji)盒規(gui)格：96T/48T

周(zhou)期(qi)素(su)Y/X抗(kang)體

含(han)錨蛋(dan)白重(zhong)復(fu)序列-細(xi)胞(bao)因子信(xin)號抑(yi)制(zhi)物(wu)盒蛋(dan)白家(jia)族2抗體(ti)

三磷(lin)酸(suan)腺(xian)苷結(jie)合(he)轉運蛋(dan)白G超(chao)家族成員5抗(kang)體(ti)

NDUFB7蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

線粒(li)體鐵轉(zhuan)運蛋(dan)白1抗(kang)體

胞(bao)漿(jiang)蛋(dan)白PACSIN3抗(kang)體

磷酸(suan)化單絲蛋(dan)白激酶1/2抗體(ti)

TYK-nu細(xi)胞(bao)CXXC型(xing)鋅指(zhi)蛋(dan)白4抗(kang)體(ti)

葉綠(lv)體伴(ban)侶(lv)蛋(dan)白抗(kang)體(ti)