U251細胞

公司產品(pin)僅(jin)供(gong)科研研究(jiu)使用、不得用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

壹、商品(pin)介(jie)紹：

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培養瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培養液，用 PBS 清洗細胞壹次；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶中，倒(dao)置顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察，待細胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培養

液終(zhong)止消化，再(zai)輕輕吹打細胞使之(zhi)脫落(luo)，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱細胞用 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然後按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分瓶傳代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培養瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培養液，用 PBS 清洗細胞壹次；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶中，倒(dao)置顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察，待細胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru)培養液終(zhong)

止消化，輕(qing)輕吹打細胞使之(zhi)脫落(luo)，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放(fang)置(zhi)於凍存(cun)管中；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍(dong)存(cun)管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中進(jin)行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使用程序降(jiang)溫盒(he)可直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞培養操作

1) 復(fu)蘇細胞：以(yi)下(xia)細胞培養凍存處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管在 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培養基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培養基後吹(chui)勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)含(han)適(shi)量培養基的培養瓶中培養過夜（或(huo)將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約(yue)8 mL培養基，培養過夜）。第(di)二(er)天(tian)換液並檢查(zha)細胞密(mi)度。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如果細胞密(mi)度達 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去培養上(shang)清，用不含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中，使消(xiao)化液(ye)浸潤所(suo)有(you)細胞，將(jiang)培養瓶置於(yu)37℃培養箱中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況而定），然後在顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細胞消(xiao)化情(qing)況，若細胞大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落(luo)，迅速拿回(hui)操作臺(tai)，輕敲幾(ji)下(xia)培養瓶後加2-3ml培養基終(zhong)止消化。輕(qing)輕打勻後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，補加1-2 mL培養液後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分(fen)到新的(de)含(han)8 mL培養基的新(xin)皿中或(huo)者瓶中，置(zhi)於培養箱中培養。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待細胞生(sheng)長(chang)狀態(tai)良好時，可進(jin)行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集細胞及(ji)細胞培養液，裝入(ru)無(wu)菌離心管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，用PBS清洗壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

b、根據細胞數(shu)量加入(ru)無(wu)血(xue)清細胞凍(dong)存(cun)液，使細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管做好標(biao)識。將(jiang)凍存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位置(zhi)以(yi)便下(xia)次拿取。

三(san)、培養註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收到細胞後(hou)首(shou)先觀察細胞瓶是否(fou)完好，培養液是否(fou)有(you)漏液(ye)、渾濁等(deng)現(xian)象，若有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和(he)我們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀細胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細胞相關信(xin)息，如細胞形(xing)態(tai)、所(suo)用培養基、血(xue)清比例(li)、所(suo)需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保(bao)細胞培養條(tiao)件(jian)壹致，若由於培養條(tiao)件(jian)不壹致而導致細胞出現問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由 客戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細胞狀態(tai)。因運輸問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞由於溫度 變(bian)化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破碎(sui)形成碎(sui)片，是正(zheng)常現象。觀(guan)察好細胞狀態(tai)後，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮(fu)細胞直(zhi)接混(hun)勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮的培養基重(zhong)懸(xuan) 細胞，並接種(zhong)到新的(de)培養瓶或培養皿中，置(zhi)於培養箱中進(jin)行(xing)培養。

5. 請客戶(hu)用相同(tong)條(tiao)件(jian)的培養基用於細胞培養。

6. 建議(yi)客(ke)戶收到細胞後(hou)前 3 天(tian)各拍幾張細胞照片(pian)，記錄(lu)細胞狀態(tai)，便於和(he)我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由於運輸的(de)原(yuan)因，個(ge)別敏感細胞會(hui)出現不穩(wen)定的情(qing)況，請及(ji)時(shi)和(he)我們聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況，以(yi)便我們的技術人員跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供(gong)科研使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用的培養基 (灌液(ye)培養基) 不能再(zai)用來培養細胞，請(qing)換用按照說(shuo)明書(shu)細胞培 養條(tiao)件(jian)新配制(zhi)的(de)培養基來培養細胞。     收到細胞後(hou)第(di)壹次傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。

公司正在(zai)出售的(de)產(chan)品(pin)：

大(da)鼠(shu)白(bai)細胞介(jie)素(su)25(IL-25)ELISA試劑盒(he) 96T/48T 試劑盒(he) 組(zu)裝/原(yuan)裝

ELISAKitCC16大(da)鼠(shu)克(ke)拉(la)拉細胞蛋白規(gui)格：48T/96T

人輪狀病(bing)毒(RV)IgM 免疫試劑盒(he) Human Rotavirus,RV IgM ELISA Kit

MouseαN-acetylglucosaminidase,αNAGELISAKit小(xiao)鼠(shu)αN已(yi)酰氨基葡糖(tang)苷(gan)酶(mei)(αNAG)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

石(shi)蠟切片組織EGFR蛋白表(biao)達(da)NBT顯(xian)色光學顯(xian)微鏡檢測試劑盒(he)10/20次

Humanazurocidin,AZUELISAKit人天青(qing)殺素(su)(AZU)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

人E Fc段(duan)受體(ti)Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA 試劑盒(he) 96T/48T 試劑盒(he) 組(zu)裝/原(yuan)裝

小(xiao)鼠(shu)水(shui)通道蛋白5(AQP-5)免疫試劑盒(he) Mouse Aquaporin 5,AQP-5 ELISA Kit

蟹特(te)定基因(yin)序列(lie)(Cytb)檢測試劑盒(he)(PCR-熒(ying)光探針法(fa)) 48T

HumanSomelysin-1,ST1ELISA試劑盒(he)人基質(zhi)裂(lie)解(jie)素(su)(ST1)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

Humanhydroxylysine,HylELISA試劑盒(he)人8羥(qiang)基脫氧鳥苷(gan)(8-OHdG)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

Humanmannanbindinglectinassociatedserineprotease,MASPELISAKit人甘露(lu)聚糖(tang)結(jie)合凝集素(su)相關絲(si)(MASP)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

大(da)鼠(shu)血(xue)管緊張素(su)原(yuan)(aGT)ELISA試劑盒(he) ，英(ying)文名： aGT ELISA Kit

人破傷(shang)風抗體(ti)(TetanusAb)ELISA檢測試劑盒(he)HumaetanusAibodyELISAKit 96T/48T

大(da)鼠(shu)c-jun 免疫試劑盒(he) Rat c-jun ELISA Kit

周(zhou)期(qi)素(su)樣(yang)Y1抗體(ti)

含(han)錨(mao)蛋白重(zhong)復(fu)序列(lie)-細胞因(yin)子(zi)信(xin)號(hao)抑(yi)制物(wu)盒(he)蛋白家(jia)族5抗體(ti)

三(san)磷(lin)酸腺苷(gan)結(jie)合轉(zhuan)運蛋白G超(chao)家族成員8抗體(ti)

NDUFB8蛋白抗體(ti)

線(xian)粒體(ti)鐵(tie)轉(zhuan)運蛋白2抗體(ti)

胞漿蛋白SH3GL3抗體(ti)

磷(lin)酸化單(dan)絲(si)蛋白激(ji)酶1抗體(ti)

U251細胞Cy3標(biao)記的(de)腱調(tiao)蛋白/軟(ruan)骨(gu)調節素(su)樣(yang)1蛋白抗體(ti)

受(shou)體(ti)4抗體(ti)