U266B1細胞

公(gong)司產品僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷！

1、細胞傳代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液終止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱細胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru)培養(yang)液終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並放置(zhi)於(yu)凍存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞凍存(cun)管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入(ru)液氮中(zhong)進行長期(qi)保(bao)存。使用程序(xu)降溫盒可(ke)直接放入(ru)-80℃。

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

二(er)、細胞培養(yang)操作

1) 復(fu)蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培養(yang)凍存(cun)處(chu)理僅(jin)供參(can)考(kao)，具(ju)體操作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨貨產品說(shuo)明書(shu)為主(zhu)。將含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍存(cun)管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條件下離心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後將所有細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適(shi)量培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過夜（或將細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜）。第二(er)天(tian)換液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞密度。

2) 細胞傳代：如果(guo)細胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄去培養(yang)上(shang)清，用(yong)不含鈣(gai)、鎂離子(zi)的(de)PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤所有細(xi)胞，將培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞情況而定(ding)），然後在顯微鏡(jing)下觀(guan)察細胞消(xiao)化(hua)情況，若細(xi)胞大部(bu)分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落，迅速(su)拿回(hui)操作臺，輕(qing)敲幾下(xia)培養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後裝入無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新的含8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長狀態良好時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及細胞培養(yang)液，裝入(ru)無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下離心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞計數。

b、根(gen)據(ju)細胞數量加(jia)入(ru)無(wu)血清細(xi)胞凍存(cun)液，使細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註意(yi)凍存(cun)管做好標(biao)識(shi)。將凍存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管位置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

三(san)、培養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後首(shou)先(xian)觀察細胞瓶(ping)是否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液是否(fou)有(you)漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現象，若有(you)上(shang)述(shu)現象 發生(sheng)請(qing)及時和我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱讀細(xi)胞說(shuo)明書(shu)，了(le)解細(xi)胞相關信(xin)息，如細(xi)胞形(xing)態、所用培養(yang)基(ji)、血清比(bi)例(li)、所需 細(xi)胞因子(zi)等(deng)，確保(bao)細(xi)胞培養(yang)條件壹致(zhi)，若由(you)於(yu)培養(yang)條件不壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現問(wen)題，責任由 客(ke)戶自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微鏡(jing)下觀(guan)察細胞狀態。因運(yun)輸(shu)問(wen)題，部分細胞由於(yu)溫度 變化及劇(ju)烈碰(peng)亡破碎形(xing)成(cheng)碎片，是正(zheng)常現象。觀(guan)察好細胞狀態後，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直接混勻收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞，並接種到(dao)新的培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱中(zhong)進行培養(yang)。

5. 請客戶用相同(tong)條件的培養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞培養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶收到(dao)細胞後前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀態，便(bian)於(yu)和我司技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原因，個(ge)別敏(min)感(gan)細胞會出(chu)現不穩定(ding)的情(qing)況，請及時和我們聯(lian)系(xi)，告(gao)知細胞 的具(ju)體(ti)情(qing)況，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅供科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用(yong)來培養(yang)細胞，請換用(yong)按(an)照說(shuo)明書(shu)細胞培 養(yang)條件新配(pei)制的(de)培養(yang)基(ji)來培養(yang)細胞。     收到(dao)細胞後第壹次(ci)傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售(shou)的(de)產品：

Humaissueinhibitorsofmetalloproteinase4，TIMP-4ELISAKit人基(ji)質金屬(shu)抑制因(yin)子(zi)4(TIMP-4)ELISA試劑(ji)盒規格(ge)：96T/48T

HumanProteinZELISA試劑(ji)盒人蛋(dan)白Z(ProteinZ)ELISA試劑(ji)盒規格(ge)：96T/48T

大鼠白細(xi)胞介素(su)24(IL24)ELISA試劑(ji)盒 ，英文名(ming)： IL24 ELISA Kit

Rat prolactin (PRL) ELISA Kit 大鼠催乳(ru)素(su)(PRL)ELISA試劑(ji)盒

Avianencephalomyelitis,AEELISAKit 禽腦(nao)脊髓炎(AE)ELISA試劑(ji)盒 96T/48T 進口(kou)分(fen)裝

ELISAKitCyPA小鼠嗜(shi)環蛋(dan)白/親環素(su)A規格：48T/96T

humanAzidothymidine,AZTELISAKit人(AZT)ELISA試劑(ji)盒規格(ge)：96T/48T

人E Fc段受(shou)體Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA 試劑(ji)盒 96T/48T 試劑(ji)盒 組裝(zhuang)/原裝

小鼠水通(tong)道蛋(dan)白4(AQP-4)免(mian)疫(yi)試(shi)劑(ji)盒 Mouse Aquaporin 4,AQP-4 ELISA Kit

蟹(xie)特(te)定(ding)基(ji)因序(xu)列(lie)(Cytb)檢(jian)測試劑(ji)盒 48T

CLIAKitforsFAS/Apo-1(RabbitsolubleFactor-relatedApoptosis)ELISAKit兔(tu)可(ke)溶性雕亡相關因(yin)子(zi)規(gui)格：48T/96T

素(su)蛋(dan)白結合(he)反(fan)應試(shi)劑(ji)盒20次(ci)

ELISAKitMTX人喋呤規格：48T/96T

大鼠血管緊張素(su)原(aGT)ELISA 試劑(ji)盒 96T/48T 試劑(ji)盒 組裝(zhuang)/原裝

人細胞絨毛蛋(dan)白/埃茲(zi)蛋(dan)白(cytovillin/ezrin)免(mian)疫(yi)試(shi)劑(ji)盒 Human cytovillin/ezrin ELISA Kit

周期素(su)依(yi)賴激酶(mei)1抗體(ti)

含錨蛋(dan)白重復(fu)序(xu)列(lie)-細胞因子(zi)信(xin)號抑制物盒蛋(dan)白家族7抗體(ti)

三磷(lin)酸腺(xian)苷(gan)酶(mei)家族蛋(dan)白2抗體(ti)

NDUFB9蛋(dan)白抗體(ti)

線(xian)粒(li)體脫偶(ou)連(lian)蛋(dan)白1抗體(ti)

胞漿(jiang)蛋(dan)白SH3GLB2抗體(ti)

磷(lin)酸化單絲蛋(dan)白激酶(mei)2抗體(ti)

U266B1細(xi)胞Cy3標(biao)記的網(wang)格(ge)蛋(dan)白重鏈(lian)抗體(ti)

受(shou)體α/α-FR 抗體(ti)