OVKATE細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使用、不得(de)用於(yu)臨床(chuang)診斷！

壹、商品(pin)介(jie)紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重懸(xuan)，然後按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru)培(pei)養液終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將其移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長期保存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降(jiang)溫盒可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存(cun)處理僅供(gong)參考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步驟以隨貨(huo)產品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後吹勻(yun)。然(ran)後將所(suo)有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜(ye)）。第二天換(huan)液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳代培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上清(qing)，用(yong)不含(han)鈣、鎂離子的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸潤(run)所(suo)有細(xi)胞(bao)，將培(pei)養瓶(ping)置於37℃培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回(hui)操作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例(li)分(fen)到新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用PBS清(qing)洗壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置以便(bian)下次(ci)拿取(qu)。

公司(si)正在出售(shou)的(de)產品(pin)：

ELISAKitGFAP神(shen)經(jing)膠(jiao)質纖(xian)維酸(suan)性蛋白(bai)規(gui)格：48T/96T

通用(yong)型(xing)HHV6-B(HUMANHERPESVIRUS6-B)病毒(du)定(ding)量(liang)PCR擴增檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)20次(ci)

大鼠雌(ci)三醇(E3)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ，英文(wen)名： E3 ELISA Kit

Mouse collagen type III (Col III) ELISA Kit 小(xiao)鼠Ⅲ型(xing)膠(jiao)原(Col Ⅲ)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

ELISA 小(xiao)鼠細(xi)胞(bao)色(se)素P450(mouse Cytochrome P450) 48T/96T 進口(kou)分(fen)裝

ELISAKitFree-T3小(xiao)鼠遊(you)離狀(zhuang)腺原規(gui)格：48T/96T

HumanColonCancerAigen，CCAELISAKit人結(jie)腸(chang)癌(ai)抗(kang)原(CCA)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

人絨(rong)毛(mao)膜(mo)β(β-HCG)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) 96T/48T 試(shi)劑(ji)盒(he) 組(zu)裝/原裝

小(xiao)鼠氧(yang)化(hua)型(xing)(GSSG)免(mian)疫試(shi)劑(ji)盒(he) Mouse oxidizided glathione,GSSG ELISA Kit

登(deng)革熱病(bing)毒(du)Ⅱ型(xing)(DFV-Ⅱ)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)(-PCR法) 48T

CLIAKitforMouselymphocytefactorELISAKit小(xiao)鼠淋巴細(xi)胞(bao)因子規(gui)格：48T/96T

體液過氧(yang)化(hua)氫(qing)(HYDROGENPEROXIDE)活(huo)性化(hua)學(xue)發(fa)光法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)20次(ci)

ELISAKit2,3-DPG人2,3-二0酸甘(gan)油(you)酸規(gui)格：48T/96T

大鼠氧(yang)化(hua)低(di)密(mi)度(du)脂(zhi)蛋白(bai)抗(kang)體(ti)(OLAb)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ，英文(wen)名： OLAb ELISA Kit

人α1微球(qiu)蛋白(bai)(α1-MG)ELISA檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)Humanα1-microglobulin,α1-MGELISAKit 96T/48T

腫(zhong)瘤/睪(gao)丸抗(kang)原家(jia)族104成(cheng)員2抗(kang)體(ti)

谷甘(gan)肽轉移(yi)酶(mei)抗(kang)體(ti)

溶(rong)質載(zai)體家(jia)族蛋白(bai)19成(cheng)員A1抗(kang)體(ti)

MGAT5B蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

纖(xian)維蛋白(bai)溶(rong)酶(mei)原抗(kang)體(ti)

白(bai)介(jie)素21抗(kang)體(ti)

磷酸(suan)化(hua)FMS樣酪激酶(mei)3

OVKATE細(xi)胞(bao)CD39樣蛋白(bai)1抗(kang)體(ti)

血(xue)紅蛋白(bai)δ抗(kang)體(ti)

三、培(pei)養註意(yi)事(shi)項 

1. 收到細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好，培(pei)養液是否有漏(lou)液、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象 發(fa)生(sheng)請及時和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信息(xi)，如細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血(xue)清比例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子等(deng)，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培(pei)養條件(jian)不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問題(ti)，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎形成(cheng)碎片，是(shi)正常現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以消化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種到新(xin)的(de)培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置於培(pei)養箱中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請客(ke)戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養基用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和我(wo)司(si)技(ji)術部(bu)溝通 交(jiao)流。由於(yu)運輸(shu)的(de)原因，個(ge)別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現(xian)不穩(wen)定(ding)的(de)情況，請及時和我(wo)們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具體情(qing)況，以便(bian)我(wo)們(men)的(de)技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科研(yan)使用。

8. 備註：運輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養基 (灌液培(pei)養基) 不能(neng)再用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養基來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後第壹次(ci)傳代建(jian)議 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。