OVTOKO細胞

公(gong)司(si)產品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於臨床(chuang)診斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品介(jie)紹：

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的(de)培養液，用(yong) PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培養(yang)

液終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕吹(chui)打細胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後將懸液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重(zhong)懸，然後按 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培(pei)養；

2、細胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的(de)培養液，用(yong) PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加入(ru)培養(yang)液終

止消(xiao)化(hua)，輕輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後將懸液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並放(fang)置(zhi)於凍存(cun)管(guan)中；

4）先將細胞凍存(cun)管(guan)放置於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後轉入(ru)液氮中進(jin)行(xing)長(chang)期保存(cun)。使(shi)用(yong)程序

降溫(wen)盒(he)可直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅供參(can)考，具(ju)體操作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產品說(shuo)明(ming)書為主(zhu)。將含有1 mL細胞懸液的(de)凍存(cun)管(guan)在 37℃水浴中迅速(su)搖(yao)晃(huang)解凍，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後將所(suo)有細胞懸液加入含適量(liang)培養(yang)基(ji)的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過夜（或(huo)將細胞懸液加入10 cm皿(min)中，加(jia)入約(yue)8 mL培養基(ji)，培(pei)養過夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並檢(jian)查細胞密度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果(guo)細胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄去(qu)培養上(shang)清，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤所(suo)有細胞，將培養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況(kuang)而定(ding)），然後在顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大部(bu)分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅速(su)拿回操作臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下培養瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕輕(qing)打勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。

c、將細胞懸液按1:2比例(li)分到(dao)新的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於培養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待(dai)細胞生長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時，可進(jin)行(xing)細(xi)胞凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及(ji)細胞培養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計數(shu)。

b、根據細胞數量(liang)加入(ru)無(wu)血(xue)清細胞凍存(cun)液，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞懸液，註意凍存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識(shi)。將凍存(cun)管(guan)放入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入(ru)液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售(shou)的(de)產品：

ELISA 小(xiao)鼠CXC趨化(hua)因子(zi)受體(ti)3(mouse CXCR3) 48T/96T 進(jin)口(kou)分(fen)裝(zhuang)

Mouse type III procollagen (P III NP) ELISA Kit 小(xiao)鼠Ⅲ型前膠(jiao)原肽(tai)(PⅢNP)ELISA試(shi)劑盒(he)

CLIAKitforLFA-3/CD58(Mouselymphocytefunctionassociatedaigen3)ELISAKit小(xiao)鼠淋巴(ba)細胞功能相(xiang)關抗(kang)原(yuan)3規(gui)格：48T/96T

通(tong)用(yong)型(xing)HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒(du)定(ding)性檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)20次

ELISAKitET-1內(nei)皮(pi)素(su)1規(gui)格：48T/96T

小(xiao)鼠酰胺腺嘌(piao)呤二(er)核苷(gan)酸(suan)(NADH)免疫試(shi)劑盒(he) Mouse nicotinamide adenine dinucleotide,NADH ELISA Kit

漢(han)坦(tan)病(bing)毒(du)Ⅱ型(HTV-Ⅱ)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)(PCR-熒光探(tan)針(zhen)法) 48T

Humanprothrombinfragme1+2,F1+2ELISA試(shi)劑盒(he)人(ren)原片段F1+2(F1+2)ELISA規格：96T/48T

ELISAKitOSM小(xiao)鼠抑(yi)瘤(liu)素(su)M規(gui)格：48T/96T

HumanCollageypeⅣ，ColⅣELISAKit人(ren)Ⅳ型膠(jiao)原(ColⅣ)ELISA試(shi)劑盒(he)規格：96T/48T

大鼠氧化(hua)低密(mi)度脂(zhi)蛋白(bai)(OxLDL)ELISA試(shi)劑盒(he) ，英(ying)文名(ming)： OxLDL ELISA Kit

人(ren)抗(kang)神(shen)經母(mu)細(xi)胞瘤(liu)抗(kang)體(ti)(NB-Ab)ELISA檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)Humanai-neuroblastoma-aibody,NB-AbELISAKit 96T/48T

大鼠Toll樣(yang)受體(ti)4(TLR4)免疫試(shi)劑盒(he) Rat toll-like receptor 4,TLR4 ELISA Kit

CLIAKitforSR(Humansecretieceptor)ELISAKit人(ren)促胰(yi)液素(su)/分(fen)泌(mi)素(su)受體(ti)規格：48T/96T

人(ren)血液載脂(zhi)蛋白(bai)B(APOLIPOPROTEINB)免疫比濁(zhuo)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)20次

腫瘤(liu)p63調節(jie)蛋白(bai)1抗(kang)體(ti)

谷(gu)氧還(hai)蛋白(bai)3抗(kang)體(ti)

溶質(zhi)載體(ti)家族蛋白(bai)21成(cheng)員(yuan)15抗(kang)體(ti)

MIA40蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

纖(xian)維蛋白(bai)原(yuan)A鏈(lian)抗(kang)體(ti)

白(bai)介(jie)素(su)22受體(ti)結合蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

磷(lin)酸(suan)化(hua)FXYD1單克隆(long)抗(kang)體(ti)

OVTOKO細(xi)胞CD3D抗(kang)體(ti)

血(xue)紅(hong)素(su)結(jie)合蛋白(bai)1抗(kang)體(ti)

三、培(pei)養註意事項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後首先觀(guan)察(cha)細胞瓶是(shi)否(fou)完好(hao)，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏液、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若有上(shang)述現(xian)象 發生(sheng)請及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞說(shuo)明(ming)書，了(le)解細胞相(xiang)關信息(xi)，如細(xi)胞形態、所(suo)用(yong)培(pei)養基(ji)、血(xue)清比例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因子(zi)等(deng)，確(que)保細胞培養(yang)條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若由(you)於培養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現(xian)問題(ti)，責任由 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀(zhuang)態。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細(xi)胞由於溫度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈碰亡破碎(sui)形(xing)成碎(sui)片，是正(zheng)常現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置(zhi)於 37℃培養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮細(xi)胞直(zhi)接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培養基(ji)重(zhong)懸 細胞，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的(de)培養瓶(ping)或(huo)培養皿(min)中，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同條(tiao)件的(de)培養基(ji)用(yong)於細胞培養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞後前 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細胞照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於和我(wo)司技(ji)術部(bu)溝通(tong) 交(jiao)流。由(you)於運(yun)輸(shu)的(de)原因，個別敏(min)感(gan)細胞會出(chu)現(xian)不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的(de)技術人(ren)員跟蹤回訪直(zhi)至(zhi)問題(ti)解決。

7. 該細胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培養基(ji) (灌(guan)液培養基(ji)) 不(bu)能再(zai)用(yong)來(lai)培養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書細(xi)胞培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配制的(de)培養基(ji)來(lai)培養(yang)細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。