P1HTR細(xi)胞(bao)

公司產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨床(chuang)診斷！

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中進(jin)行(xing)長期保存。使(shi)用(yong)程序

降(jiang)溫(wen)盒可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存(cun)處理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具體操作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明書為主。將含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍存管(guan)在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混合(he)均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將所有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適量(liang)培養基(ji)的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培養。

a、棄(qi)去(qu)培養上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸潤(run)所(suo)有細(xi)胞(bao)，將培養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況而(er)定），然(ran)後(hou)在顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿回操作(zuo)臺，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝入(ru)無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例(li)分到新(xin)的含(han)8 mL培養基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝入(ru)無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍存管(guan)凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意凍存(cun)管(guan)做(zuo)好標識。將凍存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公司正在出(chu)售的產品(pin)：

SH2 carrier protein (SHC/SLP-76) ELISA Kit 人SH2攜(xie)帶蛋(dan)白(SHC/SLP-76)ELISA試(shi)劑盒

大鼠雌(ci)激素受體β(ERβ)ELISA試(shi)劑盒 ，英文名(ming)： ERβ ELISA Kit

Ratmacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISAKit 大鼠巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)炎癥蛋(dan)白5(MIP-5)ELISA試(shi)劑盒 96T/48T 進(jin)口分裝

CLIAKitforCT(HumanChlamydiaachomatis)ELISAKit人沙(sha)眼(yan)衣(yi)原體規(gui)格(ge)：48T/96T

細(xi)胞(bao)西尼(ni)羅病(bing)毒(du)(WVVPROTEASE)活性熒光淬滅法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒20次

人熱(re)休(xiu)克(ke)蛋(dan)白糖蛋(dan)白96(HSP gp96)ELISA 試(shi)劑盒 96T/48T 試(shi)劑盒 組裝/原裝

小鼠牙(ya)本(ben)質(zhi)基(ji)質(zhi)蛋(dan)白1(DMP1)免(mian)疫(yi)試(shi)劑盒 Mouse Dein Maix Protein 1,DMP1 ELISA Kit

漢坦(tan)病(bing)毒(du)Ⅱ型(HTV-Ⅱ)檢(jian)測試(shi)劑盒(-PCR法(fa)) 48T

HumanProthrombin,PTELISA試(shi)劑盒人原(PT)ELISA試(shi)劑盒規(gui)格(ge)：96T/48T

ELISAKitHBcAb小鼠乙(yi)型肝(gan)炎核心(xin)抗體規(gui)格(ge)：48T/96T

ELISAKitMIF人巨噬(shi)細(xi)胞(bao)移(yi)動抑(yi)制因子規(gui)格(ge)：48T/96T

大鼠氧化(hua)低(di)密(mi)度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(OxLDL)ELISA 試(shi)劑盒 96T/48T 試(shi)劑盒 組裝/原裝

人腺(xian)苷(gan)酸(suan)環化(hua)酶1(AC-1)免(mian)疫(yi)試(shi)劑盒 Human adenylyl cyclase 1,AC-1 ELISA Kit

L-半乳(ru)糖苷(gan)-1,4-內酯脫氫(qing)酶(Gal LDH)測試(shi)盒 可見(jian)分(fen)光光度(du)法(fa) 50管/48樣(yang)

Ratmonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP-1/MCAFELISA試(shi)劑盒大鼠單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)趨(qu)化(hua)蛋(dan)白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試(shi)劑盒規(gui)格(ge)：96T/48T

腫(zhong)瘤p63調節樣(yang)蛋(dan)白抗體

谷氧還(hai)蛋(dan)白5抗體

溶質(zhi)載體家(jia)族(zu)蛋(dan)白21成(cheng)員(yuan)1C1抗體

MICAL3蛋(dan)白抗體

纖維(wei)蛋(dan)白原γ鏈抗體

白介(jie)素22受體抗體

磷酸(suan)化(hua)GADD153抗體

P1HTR細(xi)胞(bao)CD3D重(zhong)組(zu)兔單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體

血紅素抗體

三、培養註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好，培(pei)養液(ye)是(shi)否有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等現象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述現象(xiang) 發(fa)生請及時(shi)和(he)我們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息，如細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基(ji)、血清比例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養條件壹致(zhi)，若由(you)於(yu)培(pei)養條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問(wen)題(ti)，部(bu)分細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈碰(peng)亡破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種到新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培養。

5. 請客(ke)戶用(yong)相(xiang)同條件的培養基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議客(ke)戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於和我司技術(shu)部(bu)溝通 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸的(de)原因，個別(bie)敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不(bu)穩定的情況，請及時(shi)和(he)我們聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情況，以(yi)便我們的技術(shu)人員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪直至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸用(yong)的(de)培(pei)養基(ji) (灌(guan)液培(pei)養基(ji)) 不(bu)能(neng)再用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用(yong)按(an)照說明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養基(ji)來(lai)培養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。