NCI-H526H526細胞(bao)

公司產品僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得用(yong)於臨床診(zhen)斷(duan)！

壹、商品(pin)介紹(shao)：

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生長至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮變圓後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕輕吹打細胞使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養基重(zhong)懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進行分(fen)瓶傳代(dai)，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生長至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮變圓後(hou)加入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹打細胞使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞凍(dong)存管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長期(qi)保存。使用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存處理(li)僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體操(cao)作(zuo)步(bu)驟以隨貨產品說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培養基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心3 min，棄去上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培養基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)含適量(liang)培養基的(de)培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細胞懸液加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第二(er)天(tian)換液並(bing)檢查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細胞傳(chuan)代：如果(guo)細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可進行傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去培(pei)養上(shang)清，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離子的(de)PBS潤洗細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤所有(you)細(xi)胞，將(jiang)培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況(kuang)而定），然(ran)後(hou)在顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若細胞大(da)部分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加2-3ml培養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞懸液(ye)按(an)1:2比例(li)分(fen)到新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞生長狀態良(liang)好(hao)時，可進行細胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞及(ji)細胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心4 min，棄去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數量(liang)加入(ru)無血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做好(hao)標識(shi)。將凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

公司正在出售(shou)的(de)產品：

細胞(bao)組織H（CATHEPSIN H）活性(xing)熒光定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

組蛋白H3-S28磷(lin)酸化檢測(ce)試(shi)劑盒

pADEASY- pSHUTTLE＋目(mu)的(de)基因(yin)

石(shi)蠟切(qie)片(pian)組織CYTOCHROME C蛋白表達(da)熒光顯微鏡(jing)檢測(ce)試(shi)劑盒

血液(ye)糖(tang)胺(an)多(duo)糖(tang)（GAG）總含(han)量(liang)阿爾新藍(lan)（alcian blue）比色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

血液(ye)3-磷(lin)酸(suan)甘油醛(quan)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（GAPDH）活性(xing)酶動(dong)力(li)比色法(fa)

細胞(bao)中(zhong)鏈(lian)脂酰合成酶（ACYL COA SYNTHETASE）

血液(ye)（THROMBIN）活性(xing)熒光定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

組織甘肽(tai)還(hai)原酶(mei)活性(xing)比色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

細(xi)胞(bao)EBV（EPSTEIN-BARR）病毒定性(xing)檢測(ce)試(shi)劑盒

細(xi)胞(bao)CASPASE-2蛋白表達(da)流式細胞儀檢測(ce)試(shi)劑盒

培(pei)養液(ye)木(mu)糖(tang)比色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

H4-K4乙(yi)酰化

細(xi)胞PRK2激(ji)酶活性(xing)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒（A/B/C）

BrdU標記(ji)法(fa)細(xi)胞繁殖(zhi)比色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

中(zhong)心(xin)體(ti)蛋白2抗(kang)體(ti)

磷酸核糖(tang)基焦(jiao)磷酸(suan)酰胺基轉(zhuan)移(yi)酶

溶(rong)質(zhi)載(zai)體(ti)家(jia)族19成員(yuan)3抗(kang)體(ti)

MCART6蛋白抗(kang)體(ti)

細胞周(zhou)期(qi)蛋白依(yi)賴性(xing)激酶抑(yi)制(zhi)劑2B抗(kang)體(ti)

巴(ba)爾得-別(bie)德(de)爾綜(zong)合征(zheng)相(xiang)關(guan)蛋白7抗(kang)體(ti)

磷酸化BRD2蛋白重(zhong)組兔單克(ke)隆抗(kang)體(ti)

NCI-H526[H526]細(xi)胞CD226抗(kang)體(ti)

血管(guan)緊張(zhang)素(su)原抗(kang)體(ti)

三、培養註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收到細胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察(cha)細(xi)胞瓶是否完(wan)好(hao)，培養液(ye)是否有(you)漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現象，若有(you)上(shang)述(shu)現象 發生請及(ji)時和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞相關信(xin)息(xi)，如細(xi)胞形態、所用培(pei)養基、血清比例(li)、所需 細胞因(yin)子等(deng)，確(que)保細胞(bao)培養條(tiao)件壹致(zhi)，若由於(yu)培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹致(zhi)而導致(zhi)細胞出現問題，責任由 客戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表面(mian)，顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度 變化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰亡(wang)破碎(sui)形成碎片(pian)，是正常現象。觀察(cha)好(hao)細胞(bao)狀態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可以消(xiao)化，懸(xuan)浮細(xi)胞直(zhi)接混(hun)勻(yun)收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養基重(zhong)懸 細胞，並(bing)接種到新的(de)培(pei)養瓶或培(pei)養皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進(jin)行培養。

5. 請客(ke)戶(hu)用相同條(tiao)件的(de)培(pei)養基用(yong)於(yu)細胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶收到細胞後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細胞(bao)狀(zhuang)態，便於(yu)和我司技術(shu)部(bu)溝通(tong) 交流。由於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞會出現不(bu)穩(wen)定的(de)情(qing)況(kuang)，請及(ji)時和我們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以便我們(men)的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問題解決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科研(yan)使用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養基 (灌(guan)液(ye)培養基) 不(bu)能再用(yong)來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換用按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配制(zhi)的(de)培(pei)養基來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收到細胞後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。