NCI-H64H64細胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅供(gong)科(ke)研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮(suo)變圓後(hou)加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例進行分(fen)瓶傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮(suo)變圓後(hou)加入培(pei)養(yang)液終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞，並放(fang)置於凍(dong)存(cun)管中；

4）先將(jiang)細胞(bao)凍存管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其移入-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中進行長期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫盒可直接(jie)放(fang)入-80℃。

壹(yi)、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操作

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅供(gong)參考，具體操作步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說明書(shu)為(wei)主。將(jiang)含有1 mL細胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水浴中迅速(su)搖(yao)晃解凍，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞(bao)懸(xuan)液加入含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿(min)中，加入約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜）。第二(er)天(tian)換(huan)液並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤所(suo)有細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓並脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回操作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比例分(fen)到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞生(sheng)長狀態(tai)良好(hao)時(shi)，可進行細胞凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進行細胞計數。

b、根據(ju)細(xi)胞數量(liang)加入無(wu)血清(qing)細(xi)胞凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸液，註意凍(dong)存管做好(hao)標(biao)識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌儲存。記錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：

組(zu)織樣品組(zu)織H（CATHEPSIN H）活(huo)性(xing)熒光定量(liang)檢測試(shi)劑盒

組(zu)蛋白H3-S31磷(lin)酸化(hua)檢測試(shi)劑盒

pSHUTTLE＋目的(de)基(ji)因(yin)

載(zai)玻片細胞(bao)CYTOCHROME C蛋白表達(da)NBT顯(xian)色(se)光學顯(xian)微鏡檢測試(shi)劑盒

體(ti)液糖胺多糖（GAG）總含量(liang)阿爾新藍(lan)（alcian blue）比(bi)色(se)法定量(liang)檢測試(shi)劑盒

3-磷(lin)酸甘(gan)油醛(quan)脫(tuo)氫酶（GAPDH）活(huo)性(xing)終點比(bi)色(se)法定量(liang)檢測試(shi)劑盒

細(xi)胞長(chang)鏈脂酰(xian)合成(cheng)酶（ACYL COA SYNTHETASE）

細胞(bao)（THROMBIN）活(huo)性(xing)熒光定量(liang)檢測試(shi)劑盒

酵(jiao)母(mu)甘(gan)肽還原酶活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法定量(liang)檢測試(shi)劑盒

組(zu)織EBV（EPSTEIN-BARR）病(bing)毒(du)定(ding)性(xing)檢測試(shi)劑盒

載(zai)玻片細胞(bao)CASPASE-2蛋白表達(da)熒光顯(xian)微鏡檢測試(shi)劑盒

酒(jiu)類尿(niao)素比(bi)色(se)法定量(liang)檢測試(shi)劑盒

通(tong)用(yong)細(xi)胞載(zai)玻片制(zhi)備試劑盒

組(zu)織PRK2激(ji)酶活(huo)性(xing)定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑盒（A/B/C）

BrdU標(biao)記法(fa)細胞(bao)繁殖(zhi)熒光定量(liang)檢測試(shi)劑盒

中心(xin)體(ti)蛋白3抗(kang)體

酶1/Glutaminase抗(kang)體(ti)

溶質載(zai)體家族(zu)1成(cheng)員7抗體

MCCC1蛋白抗體

細胞周期(qi)蛋白依賴性(xing)激(ji)酶抑(yi)制(zhi)劑2C抗體(ti)

巴爾得(de)-別(bie)德爾(er)綜(zong)合征(zheng)相關蛋白8抗(kang)體

磷(lin)酸化(hua)B淋(lin)巴細胞(bao)銜接分(fen)子DAPP1抗體

NCI-H64[H64]細胞CD229抗體

血管緊(jin)張素轉(zhuan)換(huan)酶2單克(ke)隆(long)抗(kang)體

三、培(pei)養(yang)註意事項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)首先觀(guan)察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否有漏(lou)液、渾濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述(shu)現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了(le)解細胞(bao)相關信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所(suo)需 細胞因(yin)子等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題，責(ze)任由(you) 客戶(hu)自行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞瓶表面，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題，部分(fen)細胞(bao)由(you)於溫度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰亡破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞(bao)狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細胞，並接種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用(yong)相同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾張細(xi)胞(bao)照片，記錄(lu)細(xi)胞狀態(tai)，便(bian)於和我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流。由(you)於運輸的(de)原因(yin)，個別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不(bu)穩定(ding)的(de)情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具(ju)體(ti)情況，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至問(wen)題解決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供(gong)科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註：運輸用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能再用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按(an)照說明書(shu)細胞(bao)培(pei) 養(yang)條件(jian)新配制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。