NCI-H69細胞(bao)

公(gong)司產(chan)品僅供(gong)科(ke)研研究使用、不得(de)用(yong)於臨床(chuang)診斷！

1、細胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置顯微鏡(jing)下觀察，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶傳代，最後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置顯微鏡(jing)下觀察，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入培養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的(de)凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放(fang)置於凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細胞(bao)凍(dong)存管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進行(xing)長期(qi)保存。使(shi)用(yong)程序

降溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接放(fang)入-80℃。

壹(yi)、商(shang)品介紹(shao)：

二、細胞(bao)培養(yang)操作

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅供(gong)參(can)考，具(ju)體(ti)操作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說明(ming)書(shu)為(wei)主。將含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖晃解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入含適量培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二天換液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳代：如(ru)果細胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即可(ke)進行傳代培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清，用不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶置於37℃培養(yang)箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微鏡(jing)下觀察細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若細胞(bao)大部分變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基的(de)新(xin)皿中或(huo)者瓶中(zhong)，置於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時(shi)，可進(jin)行細胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中(zhong)，1000 rpm條件下離(li)心4 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據細胞(bao)數量(liang)加入無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支凍存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管(guan)位(wei)置以便(bian)下次拿(na)取。

公(gong)司正在出(chu)售的(de)產(chan)品：

細胞(bao)組(zu)織E（CATHEPSIN E）活(huo)性熒光定(ding)量(liang)檢測試劑盒

冰凍切(qie)片(pian)組(zu)織組(zu)蛋白(bai)熒(ying)光顯微鏡(jing)檢測試劑盒

pPICZ＋目(mu)的(de)基因

細胞(bao)CYTOCHROME C蛋白(bai)表(biao)達(da)比色法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒

血(xue)液(ye)O鏈(lian)接硫酸酯(zhi)化(hua)糖(tang)胺(an)多(duo)糖(tang)（O-sGAG）含(han)量阿(e)爾(er)新(xin)藍（alcian blue）比(bi)色法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒

線粒體(ti)超氧化(hua)物(wu)歧化(hua)酶(mei)（Mn/Fe SOD）分離(li)試劑盒

組(zu)織短(duan)鏈(lian)脂(zhi)酰(xian)合成(cheng)酶(mei)（ACYL COA SYNTHETASE）

ACTIVATED PC

組(zu)織甘肽合成(cheng)酶(mei)活性(xing)比(bi)色法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒

細胞(bao)EBV（EPSTEIN-BARR）病(bing)毒(du)定量(liang)PCR擴(kuo)增檢測試劑盒

載玻片(pian)細胞(bao)CASPASE-2蛋白(bai)表(biao)達(da)NBT顯色光學(xue)顯微鏡(jing)檢測試劑盒

肉類尿(niao)素(su)比(bi)色法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒

細胞(bao)免(mian)疫(yi)熒(ying)光顯微鏡(jing)間接檢測(ce)試劑盒（含(han)壹(yi)抗和(he)熒(ying)光二抗）

細胞(bao)ROCK-I激(ji)酶(mei)活性(xing)定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒（A/B/C）

BrdU標(biao)記法(fa)組(zu)織石(shi)蠟(la)切(qie)片(pian)細胞(bao)繁(fan)殖(zhi)熒(ying)光顯微鏡(jing)檢測試劑盒

中(zhong)心體(ti)蛋白(bai)70/p10結(jie)合蛋白(bai)抗體(ti)

轉(zhuan)胺(an)酶(mei)1抗體(ti)

溶(rong)質(zhi)載體(ti)家(jia)族22成(cheng)員14抗體(ti)

MCF2變換序(xu)列(lie)樣(yang)蛋白(bai)2抗體(ti)

細胞(bao)周(zhou)期(qi)後(hou)期(qi)促進(jin)蛋白(bai)亞基11抗體(ti)

白(bai)蛋白(bai)（內(nei)參）抗體(ti)

磷(lin)酸化(hua)CD19抗體(ti)

NCI-H69細胞(bao)CD23/FcεRII重(zhong)組(zu)兔(tu)單(dan)克隆(long)抗體(ti)

血(xue)管(guan)擴(kuo)張(zhang)刺(ci)激(ji)磷(lin)蛋白(bai)抗體(ti)

三(san)、培養(yang)註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收到(dao)細胞(bao)後(hou)首先(xian)觀察細胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完好，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現象 發(fa)生(sheng)請及(ji)時和(he)我們聯(lian)系。

2. 仔細閱讀(du)細胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細胞(bao)相關信(xin)息(xi)，如細胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培養(yang)基、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因子(zi)等(deng)，確保(bao)細胞(bao)培養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若由(you)於培養(yang)條(tiao)件(jian)不壹(yi)致而(er)導(dao)致細胞(bao)出(chu)現問題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶表(biao)面，顯微鏡(jing)下觀察細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸問題(ti)，部(bu)分細胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正常(chang)現(xian)象。觀察好細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接混勻(yun)收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並(bing)接種到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿中，置於培養(yang)箱(xiang)中進行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相同(tong)條件的(de)培養(yang)基用(yong)於細胞(bao)培養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和(he)我司技術(shu)部溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由(you)於運(yun)輸的(de)原因，個(ge)別敏感(gan)細胞(bao)會(hui)出(chu)現不穩定的(de)情況，請及(ji)時和(he)我們聯(lian)系，告(gao)知細胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況，以便(bian)我們的(de)技術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪直(zhi)至問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培養(yang)基) 不能(neng)再(zai)用來培養(yang)細胞(bao)，請換用(yong)按照說明書(shu)細胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基來(lai)培養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。