NCI-H1869細胞

公(gong)司產品(pin)僅(jin)供科研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下觀察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培養

液終止消化，再輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳代(dai)，最後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中(zhong)培養；

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下觀察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入(ru)培養液終

止消化，輕輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移入-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行長(chang)期保存。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒可(ke)直(zhi)接放(fang)入-80℃。

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

二、細(xi)胞(bao)培養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培養凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供參考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產品(pin)說(shuo)明(ming)書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基混(hun)合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻。然後(hou)將(jiang)所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適量培養基的(de)培養瓶中(zhong)培養過夜(ye)（或將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養基，培(pei)養過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如果細(xi)胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代(dai)培養。

a、棄去培養上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中(zhong)，使(shi)消化液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況而(er)定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下觀察細胞(bao)消化情況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓並脫(tuo)落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終止消化。輕輕(qing)打(da)勻後裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹勻。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到(dao)新的(de)含8 mL培養基的(de)新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進(jin)行細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養液，裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無血清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位置以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公司正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產品(pin)：

通用(yong)型(xing)組(zu)織對氧磷酶(mei)1（PON1）有(you)機(ji)磷酸(suan)酶(mei)活性(xing)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒

微型RNA（miRNA）擴增試(shi)劑盒

氣生(sheng)蘭（epiphytic）移植(zhi)維(wei)護(hu)培(pei)養基

冰凍(dong)切片(pian)組(zu)織JNK/SAPK蛋白(bai)表(biao)達熒(ying)光(guang)顯微鏡檢測試(shi)劑盒

通用(yong)型(xing)疫(yi)病菌種(zhong)（Phytophthora species）基因(yin)檢測(ce)試(shi)劑盒

組(zu)織糖(tang)原硫(liu)酸(suan)蒽(en)酮比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒

組(zu)織總酶(mei)連續循環(huan)熒(ying)光(guang)定量檢測(ce)試(shi)劑盒

細胞組(zu)織型纖(xian)維蛋白(bai)溶(rong)酶(mei)原激活劑（tPA）活性比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒

植(zhi)物(wu)氧化型甘肽(tai)（GSSG）濃度(du)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒

細菌賴(lai)鐵(tie)瓊脂平板

BAD蛋白(bai)表(biao)達ELISA定量檢測(ce)試(shi)劑盒

通用(yong)型(xing)果(guo)膠(jiao)酶(mei)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒

M. marinum RFLP基因(yin)分析試(shi)劑盒

組(zu)織PKCα激酶(mei)活性(xing)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒（A/B/C）

動(dong)物(wu)組(zu)織β-半(ban)乳糖(tang)苷酶(mei)活性(xing)高(gao)質敏(min)感比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒

致(zhi)癌(ai)基(ji)因(yin)C-Myc抗(kang)體(ti)

谷(gu)草(cao)酰乙酸(suan)轉氨(an)酶(mei)1樣蛋白(bai)1抗(kang)體(ti)

溶酶(mei)體(ti)相(xiang)關(guan)膜蛋白(bai)3抗(kang)體(ti)

MaFF相(xiang)關(guan)蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

細胞粘(zhan)合素(su)/腱糖(tang)蛋白(bai)-C/固(gu)生(sheng)蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

艾滋病(bing)病(bing)毒Nef抗(kang)體(ti)

磷酸(suan)甘露糖(tang)異構酶(mei)抗(kang)體(ti)

NCI-H1869細胞(bao)CAST1蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

嗅(xiu)球(qiu)蛋白(bai)3抗(kang)體(ti)

三、培養註意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到細(xi)胞後(hou)首先(xian)觀察細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培養液是(shi)否有(you)漏液、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上(shang)述現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯系。

2. 仔細閱(yue)讀細胞說明(ming)書，了(le)解細胞(bao)相(xiang)關(guan)信息(xi)，如細胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血清(qing)比(bi)例(li)、所需(xu) 細胞(bao)因(yin)子等，確(que)保細胞培養條件壹(yi)致(zhi)，若由(you)於(yu)培(pei)養條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細胞(bao)出現問(wen)題(ti)，責任由(you) 客(ke)戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微(wei)鏡下觀察細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題(ti)，部分(fen)細胞(bao)由(you)於(yu)溫度(du) 變化及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀察好(hao)細胞(bao)狀態(tai)後(hou)，75%酒精消毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混(hun)勻收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的(de)培養基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新的(de)培養瓶或(huo)培養皿(min)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進行(xing)培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相(xiang)同(tong)條件的(de)培養基用(yong)於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建議客(ke)戶收(shou)到細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技術(shu)部溝(gou)通 交流。由於(yu)運(yun)輸的(de)原因(yin)，個(ge)別敏(min)感細胞會出現不(bu)穩定的(de)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯系，告知細胞 的(de)具(ju)體(ti)情況，以(yi)便(bian)我們的(de)技術(shu)人員(yuan)跟蹤回(hui)訪(fang)直(zhi)至問(wen)題(ti)解決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用(yong)的(de)培養基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養基) 不(bu)能再用(yong)來培養細胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書細胞(bao)培(pei) 養條件新配制的(de)培養基來培養細胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。