NCI-H196H196細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產品僅(jin)供科(ke)研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷(duan)！

壹、商(shang)品介紹：

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入 5ml 培(pei)養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再(zai)輕輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸液轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入培(pei)養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸液轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後轉入液氮中進(jin)行(xing)長(chang)期(qi)保存。使(shi)用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫盒可(ke)直(zhi)接放入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存(cun)處理(li)僅(jin)供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步驟以隨貨產品說明(ming)書(shu)為(wei)主。將含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適量培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜(ye)）。第二天(tian)換液(ye)並檢查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進行傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸潤所(suo)有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定），然(ran)後在(zai)顯微鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落，迅(xun)速拿(na)回(hui)操作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終止(zhi)消化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後裝入無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態良好時，可進(jin)行細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝入無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加(jia)入無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意凍存管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿(na)取。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的產品：

通用(yong)型血(xue)液對氧(yang)磷酶(mei)1（PON1）有(you)機(ji)磷(lin)酸酶(mei)活性熒(ying)光定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

微(wei)型(xing)RNA（miRNA）北方雜交(jiao)試劑(ji)盒

地生蘭(lan)（terrestrial）增殖(zhi)培(pei)養基(ji)

石(shi)蠟(la)切片組(zu)織JNK/SAPK蛋白(bai)表(biao)達(da)NBT顯(xian)色(se)光(guang)學(xue)顯微(wei)鏡(jing)檢測(ce)試劑(ji)盒

通用(yong)型蘇(su)雲金(jin)桿菌（Bacillus thuringiensis）基(ji)因檢測(ce)試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)D-糖激酶(mei)法(fa)定(ding)量檢測(ce)試劑(ji)盒

血(xue)液(ye)遊(you)離(li)酶(mei)連(lian)續(xu)循(xun)環熒(ying)光定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

組(zu)織樣品(pin)組(zu)織型纖(xian)維(wei)蛋白(bai)溶酶(mei)原(yuan)激活(huo)劑(ji)（tPA）活(huo)性熒(ying)光定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

體(ti)液(ye)甘(gan)肽（GLUTATHIONE）總(zong)濃(nong)度(du)熒(ying)光定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

細(xi)菌脫(tuo)氧(yang)酸鹽(yan)瓊脂平(ping)板

石(shi)蠟(la)切片組(zu)織BAX蛋白(bai)表(biao)達(da)熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢測(ce)試劑(ji)盒

乳(ru)品(pin)果(guo)膠酶(mei)比色(se)法(fa)定(ding)量檢測(ce)試劑(ji)盒

M. fortuitum RFLP基(ji)因分析試劑(ji)盒

組(zu)織PKCβ2激(ji)酶(mei)活性定量檢測(ce)試劑(ji)盒（A/B/C）

真(zhen)菌/酵(jiao)母(mu)細(xi)胞(bao)β-半(ban)乳糖苷酶(mei)活性超(chao)敏(min)熒(ying)光定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

致(zhi)瘤(liu)磷(lin)蛋白(bai)32相(xiang)關蛋白(bai)1抗體

谷(gu)受(shou)體(ti)2B抗體

溶(rong)血(xue)磷(lin)脂酸受(shou)體(ti)蛋白(bai)1/EDG2抗體

Malectin蛋白(bai)抗體

細(xi)胞(bao)質(zhi)脆(cui)性X智(zhi)力低下蛋白(bai)結合(he)蛋白(bai)2抗體

艾(ai)滋(zi)病(bing)病(bing)毒(du)抗體

磷(lin)酸(suan)核(he)糖焦磷酸合(he)成(cheng)酶(mei)2抗體

NCI-H196[H196]細(xi)胞(bao)CBX7蛋白(bai)抗體

選擇(ze)連(lian)接(jie)蛋白(bai)32抗體

三(san)、培(pei)養註意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養液(ye)是(shi)否有(you)漏液、渾濁等現(xian)象(xiang)，若有(you)上述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生請(qing)及(ji)時和我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養基(ji)、血清比例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任由 客(ke)戶自(zi)行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運輸(shu)問題(ti)，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度(du) 變化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培(pei)養基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱中進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相同(tong)條件的(de)培(pei)養基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議客(ke)戶收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部溝(gou)通 交流(liu)。由(you)於(yu)運輸(shu)的原(yuan)因，個別敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩定(ding)的情(qing)況(kuang)，請及(ji)時和我(wo)們聯系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以便(bian)我(wo)們的技術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註：運輸(shu)用(yong)的培(pei)養基(ji) (灌液(ye)培(pei)養基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請(qing)換用(yong)按照說明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配制的培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。