NCI-H1963細(xi)胞(bao)

公司產(chan)品僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得(de)用於臨床診(zhen)斷！

壹、商(shang)品介紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止消化，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行分瓶傳代，最後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入培(pei)養液終(zhong)

止消化，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放置於(yu)凍存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍存管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移入-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮中(zhong)進行長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直接放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存處(chu)理(li)僅供(gong)參考，具體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加4 mL培(pei)養基(ji)混合均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然後(hou)將所(suo)有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入含適量(liang)培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿中(zhong)，加入約8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳代培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞(bao)，將培(pei)養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況而定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況，若細(xi)胞(bao)大(da)部分變(bian)圓並(bing)脫落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕(qing)敲幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止消化。輕(qing)輕(qing)打勻後(hou)裝(zhuang)入無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的新(xin)皿中(zhong)或者瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待(dai)細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍存。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝(zhuang)入無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數量(liang)加入無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍存液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍存管(guan)凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍存管(guan)做(zuo)好標(biao)識。將凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存管(guan)位(wei)置以(yi)便下次(ci)拿(na)取(qu)。

公司正(zheng)在出(chu)售的產(chan)品：

細(xi)胞(bao)對(dui)氧(yang)磷(lin)酶(mei)1（PON1）芳酯酶(mei)活性(xing)比(bi)色法定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

微型(xing)RNA（miRNA）酶(mei)保(bao)護(hu)分析試劑盒(he)

蘭花Knudson培(pei)養基(ji)

細(xi)胞(bao)JNK/SAPK蛋白表(biao)達比(bi)色法定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

通用(yong)型籽(zi)瓜(gua)細(xi)菌(jun)性果斑病（Acidovorax avenae subsp.citrulli；Aac）

組織(zhi)D-糖激(ji)酶(mei)法定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

細(xi)胞(bao)結(jie)合（酯化）酶(mei)連續循環熒(ying)光定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

血液組織(zhi)纖維(wei)型蛋白溶酶(mei)原激(ji)活(huo)劑(ji)（tPA）活性(xing)熒(ying)光定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

植物甘肽（GLUTATHIONE）總濃(nong)度熒(ying)光定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

低鹽LB細(xi)菌(jun)培(pei)養液

載玻(bo)片(pian)細(xi)胞(bao)BAX蛋白表(biao)達NBT顯(xian)色光學顯(xian)微鏡檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

面食(shi)植酸(suan)比(bi)色法定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

M. chelonei RFLP基(ji)因分析試劑盒(he)

細(xi)胞(bao)PKCγ激酶(mei)活性(xing)定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)（A/B/C）

細(xi)胞(bao)凍存試劑盒(he)

致(zhi)盲基(ji)因LCA5蛋白抗(kang)體(ti)

谷(gu)受體(ti)2C抗(kang)體(ti)

溶血磷(lin)脂(zhi)酸(suan)受體(ti)蛋白2/EDG4抗(kang)體(ti)

MAL蛋白抗(kang)體(ti)

細(xi)胞(bao)質(zhi)多聚(ju)腺(xian)苷酸(suan)結(jie)合蛋白1抗(kang)體(ti)

艾滋(zi)病病毒制(zhi)約錨(mao)定蛋白抗(kang)體(ti)

磷(lin)酸核(he)糖(tang)焦磷(lin)酸合成酶(mei)相(xiang)關(guan)蛋白1抗(kang)體(ti)

NCI-H1963細(xi)胞(bao)CCDC132抗(kang)體(ti)

選擇(ze)性(xing)剪接因子(zi)1抗(kang)體(ti)

三、培(pei)養註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完好(hao)，培(pei)養液是(shi)否(fou)有漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現象，若有(you)上(shang)述(shu)現象 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子(zi)等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若由(you)於培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現問題，責任(ren)由(you) 客戶自(zi)行承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態。因運輸(shu)問題，部分細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變(bian)化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎形(xing)成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後(hou)，75%酒(jiu)精消毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直接混(hun)勻收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到新(xin)的(de)培(pei)養瓶(ping)或培(pei)養皿中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進行培(pei)養。

5. 請客戶用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便於和(he)我(wo)司技術(shu)部溝通(tong) 交(jiao)流。由(you)於運(yun)輸的(de)原因，個別敏(min)感細(xi)胞(bao)會出現不穩(wen)定的情(qing)況，請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系，告知細(xi)胞(bao) 的具(ju)體(ti)情(qing)況，以便我們(men)的(de)技術(shu)人員(yuan)跟蹤回(hui)訪(fang)直至(zhi)問題解決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供(gong)科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用的(de)培(pei)養基(ji) (灌液培(pei)養基(ji)) 不能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件(jian)新(xin)配制(zhi)的(de)培(pei)養基(ji)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次(ci)傳代建(jian)議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。