NCI-H1417H1417細(xi)胞(bao)

公司(si)產(chan)品僅供科研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得用於(yu)臨(lin)床診斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒置顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終止(zhi)消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將懸液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養基(ji)重(zhong)懸，然後按 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養箱中培養；

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒置顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液(ye)終

止(zhi)消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將懸液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並放置於凍存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮中進行(xing)長期保存(cun)。使(shi)用程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培養凍存(cun)處(chu)理(li)僅供參考(kao)，具(ju)體操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說明(ming)書為主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液的(de)凍存(cun)管(guan)在 37℃水浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混合均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然後將所有(you)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培(pei)養基的(de)培養(yang)瓶中培養過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培養(yang)基，培(pei)養過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換液並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使(shi)消化(hua)液(ye)浸潤所有(you)細(xi)胞(bao)，將培養瓶(ping)置於37℃培養箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而定），然後在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況，若細(xi)胞(bao)大部分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入無菌離心管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新皿(min)中或(huo)者瓶中，置於培養箱(xiang)中培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收集細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養液，裝入無菌離心管(guan)中，1000 rpm條件下離心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮灌儲(chu)存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取。

公司(si)正在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：

細(xi)胞(bao)甘(gan)油(you)激酶（Glycerol kinase）活性(xing)酶連(lian)續反(fan)應(ying)比色(se)法定量檢(jian)測試劑盒

北方(fang)雜(za)交(jiao)試劑盒

羧化(hua)活(huo)性酶連(lian)續循環比色(se)法定量檢(jian)測試劑盒

石蠟切(qie)片組(zu)織PP2A蛋白(bai)表(biao)達(da)熒(ying)光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢測試劑盒

通用(yong)型(xing)黃瓜花(hua)葉(ye)病(bing)毒（Cucumber Mosaic Virus；CMV）

通用(yong)型(xing)甘(gan)油(you)三酯（triglyceride）含(han)量酶連(lian)續循環反(fan)應(ying)比色(se)法

細(xi)胞(bao)含(han)量比色(se)法定量檢(jian)測試劑盒

食物汙(wu)染(ran)ATP發光(guang)法(fa)定量檢(jian)測試劑盒

血液(ye)過(guo)氧(yang)化(hua)氫(qing)酶（CATALASE）催化(hua)活(huo)性比色(se)法定量檢(jian)測試劑盒

細(xi)菌(jun)茁(zhuo)糖(tang)酵(jiao)解(jie)酚(fen)紅(hong)瓊脂(zhi)平(ping)板(ban)

細(xi)胞(bao)VEGF蛋白(bai)表(biao)達(da)流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)儀檢測試劑盒

細(xi)胞(bao)培養上(shang)清(qing)麥(mai)芽(ya)糖含(han)量酶連(lian)續反(fan)應(ying)光(guang)譜(pu)法(fa)定量檢(jian)測試劑盒

人體HLA-DPB1 RFLP基因(yin)分(fen)析試劑盒

細(xi)胞(bao)NLK激酶活(huo)性定量檢(jian)測試劑盒（A/B/C）

動物細(xi)胞(bao)β-半(ban)乳(ru)糖苷酶活(huo)性化(hua)學發光法定量檢(jian)測試劑盒

脂(zhi)質(zhi)磷酸磷(lin)酸酶相關蛋白2抗(kang)體

庚(geng)型肝炎(yan)病(bing)毒多(duo)聚(ju)蛋(dan)白/Hepatitis G Virus抗(kang)體

妊(ren)娠(shen)相關血漿蛋(dan)白(bai)A2抗(kang)體

LYSMD2蛋白(bai)抗(kang)體

細(xi)胞(bao)信號(hao)轉導分(fen)子(zi)SMAD5抗(kang)體

癌胚(pei)抗(kang)原相關細(xi)胞(bao)粘(zhan)附分(fen)子(zi)16抗(kang)體

磷酸(suan)二(er)羥丙酮酰基(ji)轉移(yi)酶抗(kang)體

NCI-H1417[H1417]細(xi)胞(bao)B細(xi)胞(bao)遷移基因(yin)2抗(kang)體

嗅覺(jiao)受(shou)體5T2抗(kang)體

三(san)、培養(yang)註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否有(you)漏液、渾(hun)濁(zhuo)等現象，若有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發生請(qing)及時和我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關信息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用(yong)培(pei)養基(ji)、血清(qing)比例(li)、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因子(zi)等，確(que)保細(xi)胞(bao)培養條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由(you)於培養條件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現問題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態。因運輸問題(ti)，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變(bian)化(hua)及劇烈碰亡破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於 37℃培養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化(hua)，懸浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培養(yang)基重懸 細(xi)胞(bao)，並接種(zhong)到新的(de)培養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培養箱(xiang)中進行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同條(tiao)件(jian)的(de)培養(yang)基用於細(xi)胞(bao)培養。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後前 3 天各(ge)拍幾張細(xi)胞(bao)照片，記錄細(xi)胞(bao)狀態，便於(yu)和我(wo)司技(ji)術部溝(gou)通 交(jiao)流。由(you)於運輸的(de)原因(yin)，個別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩定的(de)情況(kuang)，請(qing)及時和我(wo)們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技(ji)術人員跟(gen)蹤(zong)回訪直(zhi)至(zhi)問題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科研(yan)使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運輸用的(de)培養(yang)基 (灌液培養基(ji)) 不(bu)能再用來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按(an)照(zhao)說明(ming)書細(xi)胞(bao)培 養條件(jian)新(xin)配(pei)制的(de)培養(yang)基來培養細(xi)胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。