MFH-ino細(xi)胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供科(ke)研研究使用、不得用於(yu)臨床診(zhen)斷(duan)！

壹、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培(pei)養

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru)培(pei)養液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存管中；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉入液氮中進行(xing)長(chang)期(qi)保存。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞：以下細(xi)胞培(pei)養凍(dong)存處(chu)理(li)僅(jin)供參(can)考，具(ju)體操(cao)作步驟以隨貨(huo)產(chan)品說(shuo)明書為(wei)主(zhu)。將含有(you)1 mL細(xi)胞懸液的(de)凍(dong)存管在 37℃水浴中迅速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件下離心3 min，棄(qi)去上(shang)清液，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻(yun)。然(ran)後將所(suo)有(you)細(xi)胞懸液加入(ru)含適(shi)量(liang)培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞懸液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如果細(xi)胞密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上(shang)清，用不含鈣(gai)、鎂離子的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤所有細(xi)胞，將培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況(kuang)而定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大部(bu)分變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿回(hui)操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打勻(yun)後裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離心管中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去上(shang)清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸液按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新皿(min)中或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時(shi)，可進行(xing)細(xi)胞凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養液，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄(qi)去上(shang)清液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加入(ru)無(wu)血清(qing)細(xi)胞凍(dong)存液，使細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉入液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存管位置(zhi)以便下次(ci)拿(na)取。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的(de)產品：

β-糖(tang)醛(quan)酸(suan)酶(mei)（β-glucuronidase）活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒(he)

桌(zhuo)面(mian)DNA清(qing)除溶(rong)液

植物(wu)線(xian)粒(li)體形(xing)態(tai)染色(se)試劑盒(he)

GSK-3ALPHA蛋(dan)白表達西(xi)方雜交分析試(shi)劑盒(he)

通(tong)用型鯉(li)魚(yu)春季(ji)病(bing)毒血(xue)癥(zheng)（Spring Viraemia of Carp；SVC）

體液N-乙酰-β-D-氨(an)基糖(tang)苷酶(mei)（NAG）活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒(he)

血(xue)液腎(shen)素（renin）熒(ying)光(guang)共振(zhen)能量(liang)轉移(yi)法(fa)（FRET）定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒(he)

冰凍(dong)切(qie)片氧化(hua)8-羥(qiang)基(ji)鳥苷（8-OHG）熒(ying)光(guang)染色(se)測定(ding)試劑盒(he)

4％多聚(ju)甲醛(quan)固著(zhe)液

沙(sha)門氏菌(jun)（Salmonella）鑒定(ding)

石(shi)蠟切(qie)片組(zu)織P38蛋(dan)白表達NBT顯(xian)色(se)光(guang)學(xue)顯(xian)微鏡檢(jian)測試劑盒(he)

飲(yin)類(lei)異檸(ning)檬酸(suan)比(bi)色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒(he)

DNA甲(jia)基轉移(yi)酶(mei)-3A（DNMT-3A）活(huo)性(xing)酶(mei)連(lian)續循(xun)環比(bi)色(se)法

細(xi)胞IKKβ激酶活(huo)性(xing)定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒(he)（A/B/C）

紅(hong)細(xi)胞膜脂質成分分離試劑盒(he)

脂肪酸(suan)去飽(bao)和酶1抗(kang)體

睪(gao)丸癌中(zhong)心(xin)體相(xiang)關(guan)蛋(dan)白抗(kang)體

人(ren)乳(ru)頭瘤病(bing)毒18型(xing)E4抗(kang)體

LRRC59蛋(dan)白抗(kang)體

細(xi)胞外基(ji)質蛋(dan)白FREM1抗(kang)體

λ輕鏈抗(kang)體

淋巴細(xi)胞活(huo)化(hua)基(ji)因-3（CD223）抗(kang)體

MFH-ino細(xi)胞BXDC1蛋(dan)白抗(kang)體

嗅覺(jiao)受(shou)體5A1抗(kang)體

三、培(pei)養註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞後首先觀察細(xi)胞瓶是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養液是否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁等現象(xiang)，若有上(shang)述現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和我們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞說明書，了(le)解細(xi)胞相關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞形(xing)態(tai)、所用培(pei)養基(ji)、血(xue)清(qing)比例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因子(zi)等，確保細(xi)胞培(pei)養條件壹(yi)致(zhi)，若由(you)於(yu)培(pei)養條件不壹致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現(xian)問(wen)題，責任由(you) 客戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀態(tai)。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細(xi)胞由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈碰亡(wang)破碎形(xing)成碎(sui)片，是正(zheng)常現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞狀態(tai)後，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直接(jie)混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培(pei)養。

5. 請(qing)客戶(hu)用相同(tong)條件的(de)培(pei)養基(ji)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後前 3 天各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照片，記(ji)錄細(xi)胞狀態(tai)，便於(yu)和我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流。由(you)於(yu)運輸(shu)的(de)原因，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞會出(chu)現(xian)不穩定(ding)的(de)情況(kuang)，請及(ji)時和我們聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具體情(qing)況，以便我們的(de)技術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供科(ke)研使用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的(de)培(pei)養基(ji) (灌液培(pei)養基(ji)) 不能再(zai)用來培(pei)養細(xi)胞，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明書細(xi)胞培(pei) 養條件新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後第壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。