MH-22A細(xi)胞(bao)

公司(si)產品僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨床診斷！

壹、商品介(jie)紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回縮變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培養

液終止消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之脫落(luo)，然後將(jiang)懸液(ye)轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養基重懸，然後按(an) 1:2 比例進行(xing)分瓶傳(chuan)代，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養箱中培養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回縮變圓後加(jia)入(ru)培養液終

止消化(hua)，輕輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之脫落(luo)，然後將(jiang)懸液(ye)轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於凍(dong)存管中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過夜，24h 後轉入液氮中進行(xing)長期保(bao)存(cun)。使用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直接放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養操作

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培養凍(dong)存處理(li)僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體操作步驟以隨(sui)貨(huo)產品說(shuo)明(ming)書為主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍(dong)存管在(zai) 37℃水浴中迅(xun)速(su)搖晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培養基混合均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心3 min，棄(qi)去上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培養基後吹(chui)勻。然後將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入(ru)含適量(liang)培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶中培養過夜（或將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入約8 mL培養基，培養過夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養。

a、棄(qi)去培養上(shang)清，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離子的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中，使消化(hua)液浸潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將培養瓶置於37℃培(pei)養箱中消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而定），然後在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部分變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培養瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養基終止消化(hua)。輕輕(qing)打(da)勻後裝(zhuang)入無菌(jun)離心管中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培養液後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比例分到新的(de)含8 mL培養基的(de)新皿(min)中或者瓶中，置於培(pei)養箱中培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生長狀態(tai)良好時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶(ping)為例；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養液，裝(zhuang)入無菌(jun)離心管中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心4 min，棄(qi)去上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數量加入(ru)無血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管做(zuo)好標(biao)識。將凍(dong)存管放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入液氮灌儲存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存管位置以便下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公司(si)正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品：

羧(suo)酸(suan)酯酶(mei)（carboxylesterase）活(huo)性(xing)比色(se)法(fa)定量檢測試(shi)劑(ji)盒

DEPC處(chu)理(li)試(shi)劑(ji)盒

植物(wu)種子葉(ye)綠體(ti)粗提(ti)分離試(shi)劑(ji)盒

GSK-3ALPHA蛋(dan)白免疫共沈澱(dian)分析試(shi)劑(ji)盒

通用(yong)型魚氣(qi)單(dan)細(xi)胞(bao)菌(jun)屬（Aeromonas salmonicida）

通用(yong)型鉀離子（K）濃(nong)度化(hua)學(xue)比色(se)法(fa)定量檢測試(shi)劑(ji)盒

腎(shen)素化學(xue)發光(guang)法定量檢測試(shi)劑(ji)盒

石(shi)蠟切(qie)片氧化(hua)8-羥(qiang)基(ji)鳥(niao)苷（8-OHG）熒(ying)光(guang)染色(se)測(ce)定試(shi)劑(ji)盒

4％中(zhong)性(xing)多聚(ju)甲(jia)醛(quan)固(gu)著(zhe)液(ye)

創(chuang)傷(shang)弧(hu)菌(jun)（Vibrio vulnificus）鑒(jian)定

細(xi)胞(bao)P38蛋(dan)白表達(da)比色(se)法(fa)定量檢測試(shi)劑(ji)盒

異檸檬酸(suan)待(dai)測樣(yang)品處(chu)理(li)試(shi)劑(ji)盒

DNA甲(jia)基(ji)轉移酶(mei)-3B（DNMT-3B）活(huo)性(xing)酶(mei)連續(xu)循環比色(se)法(fa)

組織(zhi)IKKβ激(ji)酶(mei)活(huo)性(xing)定量檢測試(shi)劑(ji)盒（A/B/C）

人(ren)體血小(xiao)板粗提(ti)分離試(shi)劑(ji)盒

脂(zhi)肪酸(suan)去(qu)飽(bao)和(he)酶(mei)6抗體

睪(gao)丸表達(da)蛋(dan)白19A抗體

人(ren)乳(ru)頭(tou)狀(zhuang)瘤(liu)病毒(du)E6相(xiang)關(guan)蛋(dan)白抗體

LRRFIP2蛋(dan)白抗體

細(xi)胞(bao)外基質蛋(dan)白(bai)FREM2抗體

阿爾茨海(hai)默(mo)病澱(dian)粉樣蛋白相(xiang)關(guan)膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)抗體

淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)抗原6B抗體

MH-22A細(xi)胞(bao)BXDC2蛋白抗體

嗅覺受(shou)體5AP2抗體

三、培養註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶是否完(wan)好，培養液是否有(you)漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現象，若(ruo)有上(shang)述現象 發生請及時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用培(pei)養基、血清比例、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等，確保(bao)細(xi)胞(bao)培養條(tiao)件壹致，若(ruo)由於(yu)培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹(yi)致而導(dao)致細(xi)胞(bao)出(chu)現問題，責任由(you) 客戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表面，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由於溫度 變化(hua)及劇(ju)烈碰亡(wang)破碎形成碎片，是正常現(xian)象。觀(guan)察好細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養箱放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以消化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直接混勻收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的(de)培(pei)養基重懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種到新的(de)培(pei)養瓶或培養皿(min)中，置於培(pei)養箱中進行(xing)培(pei)養。

5. 請客戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件的(de)培(pei)養基用於細(xi)胞(bao)培養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於和(he)我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通 交流。由(you)於運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現不(bu)穩(wen)定的(de)情(qing)況，請及時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況，以便我(wo)們(men)的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至(zhi)問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸(shu)用的(de)培(pei)養基 (灌液培(pei)養基) 不(bu)能(neng)再用(yong)來培養細(xi)胞(bao)，請換用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培 養條(tiao)件新配制的(de)培(pei)養基來培養細(xi)胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。