MHH-ES1細胞(bao)

公司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得(de)用於臨床(chuang)診斷(duan)！

壹、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消化，再(zai)輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基重懸，然後(hou)按 1:2 比(bi)例進行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養箱(xiang)中培(pei)養；

2、細胞(bao)凍存：

1）細胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru)培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消化，輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於凍存管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細胞(bao)凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉入液氮(dan)中進行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可(ke)直接放(fang)入-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培養凍存處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考，具(ju)體操(cao)作步驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說明書(shu)為主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細胞(bao)懸液的(de)凍存管(guan)在 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速搖晃解(jie)凍，加4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條件下(xia)離心3 min，棄去上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻。然後(hou)將所(suo)有細胞(bao)懸液加(jia)入(ru)含適(shi)量培(pei)養基的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天(tian)換(huan)液並檢查細胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果(guo)細胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳(chuan)代(dai)培養。

a、棄去培(pei)養上清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消化液浸潤(run)所有細胞(bao)，將培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於37℃培養箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定），然後(hou)在顯微鏡下(xia)觀察細胞(bao)消化情(qing)況(kuang)，若細胞(bao)大(da)部分(fen)變圓並脫落(luo)，迅(xun)速拿回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲幾下(xia)培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基終止(zhi)消(xiao)化。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄去上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液後(hou)吹勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液按1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養基的(de)新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍存：待(dai)細胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進行細胞(bao)凍存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養液，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄盡PBS，進行細胞(bao)計數(shu)。

b、根據細胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無血清細胞(bao)凍存液，使(shi)細胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支凍存管(guan)凍存1mL細胞(bao)懸液，註意凍存管(guan)做好標識(shi)。將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記錄凍存管(guan)位置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售(shou)的(de)產品(pin)：

細胞(bao)谷氨(an)酰(xian)半合(he)成酶（glutamyl systeine synthetase）活性比(bi)色法(fa)定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

DMDC處(chu)理(li)試(shi)劑盒(he)

植物(wu)種子活性葉(ye)綠體分離(li)試(shi)劑盒(he)

GSK-3ALPHA蛋白(bai)表達ELISA定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

通用型(xing)魚細菌性腎病(bing)（Bacterial Kidney Disease）基因檢測(ce)試劑盒(he)

細胞(bao)鉀離(li)子（K）濃(nong)度(du)化學(xue)比(bi)色法(fa)定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

細胞(bao)無機(ji)磷(lin)/遊離磷(lin)酸根離子比(bi)色法(fa)定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

氧化8-羥基(ji)鳥(niao)苷(gan)（8-OHG）高效液相(xiang)色譜(pu)（HPLC）分析(xi)試(shi)劑盒(he)

2％戊(wu)二醛固(gu)著液（Glutaraldehyde）

（Staphylococcus aureus）鑒(jian)定

細胞(bao)P38蛋白(bai)表達熒(ying)光(guang)定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

糖類(lei)乳(ru)糖含量酶連續反應(ying)光(guang)譜(pu)法定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

植物(wu)DNA甲基(ji)轉移(yi)酶（MET）總(zong)活性酶連續循環比(bi)色法(fa)

細胞(bao)IRAK1激酶活性定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)（A/B/C）

人體(ti)血(xue)小(xiao)板高純分(fen)離試(shi)劑盒(he)

脂肪(fang)酸脫(tuo)氫酶2抗體(ti)

睪丸蛋(dan)白(bai)聚(ju)糖1抗體(ti)

人水(shui)痘(dou)帶(dai)狀(zhuang)皰(pao)疹(zhen)病(bing)毒(du)gE蛋白(bai)抗體(ti)

LRSAM1蛋白(bai)抗體(ti)

細胞(bao)外基(ji)質(zhi)蛋(dan)白OMD抗體(ti)

阿(e)黑(hei)皮素(su)原(yuan)抗體(ti)

淋巴細胞(bao)抗原(yuan)6G抗體(ti)

MHH-ES1細胞(bao)BZW2蛋白(bai)抗體(ti)

嗅覺受(shou)體(ti)5AR1抗體(ti)

三(san)、培養註意事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)首(shou)先觀察細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養液是(shi)否有漏液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若有上述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞(bao)說明書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如細胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用培(pei)養基、血清比(bi)例、所(suo)需 細胞(bao)因子等(deng)，確保細胞(bao)培養條件壹致(zhi)，若(ruo)由於培養條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞(bao)出現(xian)問(wen)題，責任(ren)由 客(ke)戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下(xia)觀察細胞(bao)狀(zhuang)態。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部分(fen)細胞(bao)由於溫度(du) 變化及(ji)劇烈碰亡(wang)破碎(sui)形(xing)成碎(sui)片，是(shi)正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察好細胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸浮細胞(bao)直接混(hun)勻收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養基重懸 細胞(bao)，並接種到(dao)新(xin)的(de)培養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿中，置(zhi)於培養箱(xiang)中進行培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶用相(xiang)同(tong)條件的(de)培養基用於細胞(bao)培養。

6. 建議(yi)客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張細胞(bao)照片，記錄細胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於和我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部溝(gou)通 交(jiao)流。由於運(yun)輸(shu)的(de)原因，個別敏(min)感細胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細胞(bao) 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便我(wo)們的(de)技(ji)術(shu)人員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至(zhi)問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用的(de)培養基 (灌(guan)液培(pei)養基) 不(bu)能(neng)再(zai)用來培養細胞(bao)，請(qing)換(huan)用按照說明書(shu)細胞(bao)培 養條件新配制(zhi)的(de)培養基來培養細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。