LU99細胞

公(gong)司產(chan)品僅供科研研(yan)究使用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷！

壹、商(shang)品介紹：

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗細胞(bao)壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕輕吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗細胞(bao)壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先將細胞凍存管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行長(chang)期保(bao)存。使用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒可直接放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇細胞(bao)：以下細胞(bao)培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅供參(can)考，具(ju)體(ti)操作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨貨(huo)產(chan)品說明書(shu)為主(zhu)。將含有1 mL細胞懸液(ye)的(de)凍存(cun)管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃解凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均勻。在1000 rpm條件下離心(xin)3 min，棄(qi)去上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然後(hou)將所有細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培養瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養過夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞密度達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上清，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤所(suo)有(you)細(xi)胞，將培養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況(kuang)而定(ding)），然後(hou)在顯微(wei)鏡下觀察(cha)細胞(bao)消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下培養(yang)瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將細胞懸液(ye)按1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養基的新(xin)皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好時，可進(jin)行細胞(bao)凍存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下離心(xin)4 min，棄(qi)去上清液(ye)，用(yong)PBS清洗壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管凍存1mL細胞(bao)懸液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存管做好標識。將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置以便(bian)下次拿(na)取。

公(gong)司(si)正在出售(shou)的(de)產(chan)品：

3－羥(qiang)－3－甲戊(wu)二酰（HMG－COA）還原酶待(dai)測(ce)樣品制(zhi)備(bei)試(shi)劑(ji)盒(he)

壹步(bu)法PCR反(fan)應(ying)液(ye)

重組(zu)腺(xian)病毒效價比(bi)色(se)法定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

IL蛋白表(biao)達ELISA定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

血液(ye)牛(niu)病(bing)毒性(xing)腹瀉(xie)病(bing)毒II型（Bovine Viral Diarrhoea Virus -2；BVDV-2）定量(liang)PCR擴增(zeng)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

體(ti)液(ye)高(gao)密度(du)脂(zhi)蛋白(bai)（HDL-Cholesterol）酶連(lian)續循環比(bi)色(se)法定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

細胞組(zu)蛋白(bai)乙(yi)酰(xian)轉移(yi)酶（HAT）總活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

體(ti)液(ye)蛋(dan)白氧(yang)化（羰基化(hua)；carbonyl）熒光(guang)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

胃腸組(zu)織固(gu)著(zhe)液(ye)（Hollande固著(zhe)液(ye)）

細菌(jun)同化型鹽還(hai)原(yuan)酶活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

細胞PARP蛋白表(biao)達熒(ying)光(guang)定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

酒類D－乳酸比(bi)色(se)法定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

小鼠c－fos基因(yin)甲(jia)基(ji)化(hua)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

細胞CHK1激酶活(huo)性(xing)定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)（A/B/C）

動物單(dan)核(he)白(bai)細胞(bao)/淋巴(ba)細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)試(shi)劑(ji)盒(he)

脂(zhi)閥結(jie)構(gou)蛋白(bai)1抗體(ti)

高分(fen)子量(liang)細(xi)胞(bao)角蛋白抗體(ti)

人(ren)類乳(ru)頭(tou)狀(zhuang)瘤(liu)病毒(du)16/18 E6抗體(ti)

LMBRD2蛋白抗體(ti)

細胞生(sheng)長(chang)調(tiao)節核(he)仁蛋(dan)白抗體(ti)

γ谷氨酰(xian)轉移(yi)酶抗體(ti)

鏈抗體(ti)

LU99細胞Brachyury蛋白單(dan)克(ke)隆抗體(ti)

嗅覺(jiao)受體(ti)51B5抗體(ti)

三(san)、培養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完(wan)好，培養液(ye)是否有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象(xiang)，若有上述現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細胞(bao)說明書(shu)，了解細胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所用(yong)培養基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細胞(bao)培養條件壹致(zhi)，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條件不壹致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自行承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微(wei)鏡下觀察(cha)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇(ju)烈碰亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片，是正常現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好細胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可以消(xiao)化，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混(hun)勻收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基重懸 細胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)進(jin)行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同條件的培(pei)養基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培養。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和我司技術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由(you)於(yu)運(yun)輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏(min)感細(xi)胞會(hui)出現(xian)不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請及(ji)時和我們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以便(bian)我們(men)的技術人(ren)員跟(gen)蹤回訪直至問題(ti)解(jie)決。

7. 該細胞(bao)僅供科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用的(de)培養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養基(ji)) 不(bu)能(neng)再用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按照說明書(shu)細胞培(pei) 養(yang)條件新(xin)配(pei)制(zhi)的培養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到細胞(bao)後(hou)第(di)壹次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。