LU99A細胞(bao)

公(gong)司產(chan)品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

壹、商(shang)品介(jie)紹：

1、細胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生長至覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消化(hua)，再輕輕(qing)吹(chui)打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行分(fen)瓶(ping)傳代，最後放入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生長至覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後加入培(pei)養(yang)液終

止消化(hua)，輕輕(qing)吹(chui)打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並放(fang)置於(yu)凍(dong)存管中(zhong)；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮中(zhong)進(jin)行長期(qi)保(bao)存。使用(yong)程序(xu)

降溫盒可(ke)直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理(li)僅(jin)供參(can)考，具體(ti)操(cao)作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細胞(bao)懸液的凍(dong)存管在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合均(jun)勻。在1000 rpm條件下(xia)離(li)心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將所有(you)細(xi)胞(bao)懸液加入含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸液加入10 cm皿中(zhong)，加入約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換(huan)液並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細胞(bao)傳代：如果細胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上清，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化液浸潤(run)所有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中消化1-2 min（視細胞(bao)情況(kuang)而定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若細胞(bao)大部(bu)分變圓並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕敲幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕打(da)勻後裝(zhuang)入無(wu)菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比(bi)例(li)分到新的含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新(xin)皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生長狀態(tai)良(liang)好時，可(ke)進(jin)行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入無(wu)菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離(li)心4 min，棄去上清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數量(liang)加入無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞(bao)懸液，註意凍(dong)存管做(zuo)好標(biao)識(shi)。將凍(dong)存管放(fang)入-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮灌儲(chu)存。記錄(lu)凍(dong)存管位(wei)置以便下(xia)次拿(na)取。

公(gong)司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

通用(yong)型蘋果酸脫氫(qing)酶(mei)（MDH）活(huo)性(xing)比(bi)色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

超白金(jin)TAG DNA聚合酶(mei)

重組(zu)逆轉(zhuan)錄(lu)病毒穩(wen)態(tai)表達細胞(bao)篩(shai)選試劑盒

細胞(bao)ERK蛋(dan)白表達流式細胞(bao)儀檢(jian)測(ce)試劑盒

體液牛病毒性(xing)腹(fu)瀉(xie)病毒II型（Bovine Viral Diarrhoea Virus -2；BVDV-2）定量(liang)PCR擴增(zeng)檢(jian)測(ce)試劑盒

細胞(bao)培(pei)養(yang)液高密(mi)度脂蛋(dan)白（HDL-Cholesterol）酶連(lian)續循環比(bi)色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

組(zu)織組(zu)蛋(dan)白乙(yi)酰(xian)轉(zhuan)移(yi)酶(mei)（HAT）總活(huo)性(xing)比(bi)色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

純化線粒體蛋(dan)白氧(yang)化(hua)（羰基(ji)化(hua)；carbonyl）熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)試劑盒

前(qian)列(lie)腺固(gu)著液（Hollande固(gu)著液）

細菌異化(hua)型(xing)鹽(yan)還原酶(mei)活(huo)性(xing)比(bi)色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

PARP蛋(dan)白表達西(xi)方(fang)雜交分析試劑盒

飲料D－乳酸比色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

人體P14基(ji)因(yin)甲(jia)基(ji)化(hua)檢(jian)測(ce)試劑盒

組(zu)織CHK1激(ji)酶(mei)活(huo)性(xing)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒（A/B/C）

動物多核白(bai)細(xi)胞(bao)分離(li)試劑盒

脂肪堆(dui)積(ji)和肥(fei)胖(pang)相關(guan)蛋(dan)白抗(kang)體

高密(mi)度脂蛋(dan)白結(jie)合蛋(dan)白1抗(kang)體

人類乳(ru)頭(tou)狀瘤(liu)病(bing)毒16-E7抗(kang)體

LMO7蛋(dan)白抗(kang)體

細胞(bao)生長調控蛋(dan)白19/環指(zhi)蛋(dan)白197抗(kang)體

γ-谷氨(an)酰(xian)轉(zhuan)移(yi)酶(mei)輕(qing)鏈1抗(kang)體

鏈球(qiu)菌溶(rong)血素O抗(kang)體

LU99A細胞(bao)Brachyury蛋(dan)白抗(kang)體

嗅覺(jiao)受體51B6抗(kang)體

三、培(pei)養(yang)註意事(shi)項 

1. 收到細胞(bao)後首先觀(guan)察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是否(fou)完好(hao)，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏(lou)液、渾濁等現象(xiang)，若(ruo)有上述(shu)現象(xiang) 發(fa)生請及時和(he)我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了(le)解細(xi)胞(bao)相關(guan)信息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態、所用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清比(bi)例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等，確(que)保(bao)細胞(bao)培(pei)養(yang)條件壹致，若(ruo)由於培(pei)養(yang)條件不壹致而導(dao)致細(xi)胞(bao)出現(xian)問題(ti)，責任由 客戶自行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細胞(bao)由於溫度 變化及劇(ju)烈碰亡破碎形成碎片，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸浮細胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種到新的培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中進行培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用(yong)相同條件的培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客戶收(shou)到細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張細胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細胞(bao)狀態(tai)，便(bian)於和我(wo)司技(ji)術部(bu)溝通 交流。由於運(yun)輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現不穩定的情(qing)況，請及時和(he)我(wo)們聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具體(ti)情(qing)況，以(yi)便(bian)我(wo)們的技(ji)術人(ren)員跟蹤(zong)回訪(fang)直(zhi)至問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基(ji) (灌液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請換(huan)用(yong)按(an)照說(shuo)明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條件新(xin)配制的培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收到細胞(bao)後第壹次(ci)傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。