LU99B細胞

公司產(chan)品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究使用、不得用於臨床診(zhen)斷！

壹、商(shang)品介紹：

1、細胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞(bao)回縮變(bian)圓後加(jia)入 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止消化(hua)，再(zai)輕輕吹打細胞使之(zhi)脫(tuo)落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養基(ji)重(zhong)懸，然後按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞(bao)回縮變(bian)圓後加(jia)入培養液(ye)終(zhong)

止消化(hua)，輕輕吹打細胞使之(zhi)脫(tuo)落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存管(guan)中(zhong)；

4）先將(jiang)細(xi)胞凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮中(zhong)進(jin)行(xing)長(chang)期保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下細胞培養凍(dong)存(cun)處(chu)理僅(jin)供參考(kao)，具體(ti)操作步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)為主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃解凍，加(jia)4 mL培養基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基(ji)後吹勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含(han)適(shi)量培養基(ji)的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸液加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培養基(ji)，培養過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並檢(jian)查細胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養。

a、棄去(qu)培養上(shang)清(qing)，用不含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤所(suo)有(you)細胞(bao)，將(jiang)培養瓶(ping)置(zhi)於37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情況(kuang)而(er)定），然後在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大部(bu)分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕敲幾下培養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養基(ji)終(zhong)止消化(hua)。輕輕打勻(yun)後裝(zhuang)入無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培養液(ye)後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞懸液按1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含(han)8 mL培養基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶為例；a、收集細胞(bao)及(ji)細(xi)胞培養液(ye)，裝(zhuang)入無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數量加(jia)入無(wu)血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便下次拿(na)取(qu)。

公司正(zheng)在出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

細胞蘋果(guo)酸(suan)脫(tuo)氫酶（MDH）活性比(bi)色(se)法(fa)定量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

三磷酸(suan)脫(tuo)氧核(he)糖核(he)苷(gan)酸(suan)（dNTPs）混(hun)合(he)液(ye)

（HAT+潮(chao)）

載玻(bo)片細胞(bao)ERK蛋(dan)白(bai)表達(da)熒光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

牛病毒(du)性(xing)腹(fu)瀉(xie)病毒(du)II型(xing)（Bovine Viral Diarrhoea Virus -2；BVDV-2）標準曲(qu)線定量PCR擴(kuo)增(zeng)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

通(tong)用型(xing)低(di)密(mi)度(du)脂蛋(dan)白(bai)（LDL-Cholesterol）酶連續循環比(bi)色(se)法(fa)定量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

血小板活(huo)化(hua)因子(zi)乙(yi)酰水(shui)解酶（PAF AH）活性比(bi)色(se)法(fa)定量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

植物蛋(dan)白(bai)氧化（羰(tang)基化；carbonyl）熒光(guang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

腎(shen)組織(zhi)固(gu)著(zhe)液(ye)（BUBOSCQ-BRAZIL固著(zhe)液(ye)）

細菌鹽還(hai)原(yuan)酶定性檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

PARP蛋(dan)白(bai)免(mian)疫(yi)共沈(chen)澱(dian)分(fen)析(xi)試劑(ji)盒(he)

調料(liao)D－乳酸(suan)比(bi)色(se)法(fa)定量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

人體(ti)SNCG基因甲(jia)基化檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

細胞CHK2激(ji)酶活性(xing)定量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)（A/B/C）

白(bai)細(xi)胞(bao)培養液(ye)

脂肪(fang)堆(dui)積和肥(fei)胖(pang)相(xiang)關蛋(dan)白(bai)重(zhong)組(zu)兔(tu)單(dan)克隆(long)抗體(ti)

高密(mi)度(du)脂蛋(dan)白(bai)結(jie)合(he)蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

人類(lei)乳頭狀(zhuang)瘤(liu)病毒(du)16單(dan)克隆(long)抗體(ti)

LNP1蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

細胞生(sheng)長(chang)抑制(zhi)蛋(dan)白(bai)26/前列(lie)腺特(te)異(yi)性(xing)膜(mo)抗原(yuan)樣蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

γ-谷(gu)氨(an)酰轉(zhuan)移(yi)酶輕鏈(lian)2抗體(ti)

亮氨基肽酶3抗體(ti)

LU99B細胞(bao)BRD1蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

嗅覺受(shou)體(ti)51F1抗體(ti)

三、培養註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細胞後首(shou)先觀察細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否完(wan)好，培養液(ye)是(shi)否有(you)漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系。

2. 仔細閱(yue)讀(du)細胞說(shuo)明書(shu)，了解細胞(bao)相(xiang)關信(xin)息，如細(xi)胞(bao)形(xing)態、所(suo)用培養基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所需 細胞因子(zi)等(deng)，確(que)保細(xi)胞(bao)培養條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細胞出現(xian)問(wen)題(ti)，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運輸問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞由於(yu)溫(wen)度 變(bian)化及(ji)劇烈碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察好細胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可以(yi)消(xiao)化，懸浮細(xi)胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮的(de)培養基(ji)重(zhong)懸 細胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培養瓶(ping)或(huo)培養皿(min)中(zhong)，置於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培養。

5. 請客(ke)戶(hu)用相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培養基(ji)用於細胞培養。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞後前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張細胞(bao)照(zhao)片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便於(yu)和(he)我(wo)司技術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由於(yu)運輸的(de)原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具體(ti)情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技術人員跟蹤回訪直(zhi)至問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用的(de)培養基(ji) (灌(guan)液培養基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來培養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細胞(bao)培 養條(tiao)件(jian)新(xin)配制(zhi)的(de)培養基(ji)來培養細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細胞後第(di)壹次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。