HCT116AKT1/2(-/-)細胞

公司(si)產(chan)品僅供科研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷！

壹(yi)、商(shang)品介紹(shao)：

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋培養瓶的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消化(hua)液(ye)約 1ml 至培養瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再輕輕吹(chui)打細胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱細胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例進行分(fen)瓶傳(chuan)代，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱中(zhong)培養；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋培養瓶的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消化(hua)液(ye)約 1ml 至培養瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕輕吹(chui)打細胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞凍(dong)存管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進行(xing)長期(qi)保存。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降溫盒可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以(yi)下(xia)細胞培(pei)養凍存處理(li)僅供參考(kao)，具(ju)體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨貨產(chan)品說明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培養基混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條件下(xia)離(li)心3 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培養基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)含適量培養基的(de)培(pei)養瓶中(zhong)培養過夜(ye)（或將細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培養基，培(pei)養過夜(ye)）。第二天(tian)換液(ye)並檢(jian)查(zha)細胞密(mi)度。

2) 細胞傳(chuan)代：如果細胞密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代培養。

a、棄去(qu)培(pei)養上清，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤所(suo)有細胞，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細胞情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕敲幾下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加2-3ml培養基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將細胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例分(fen)到新的(de)含(han)8 mL培養基的(de)新皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培養。 3) 細胞凍(dong)存：待(dai)細胞生(sheng)長狀(zhuang)態良好(hao)時，可(ke)進(jin)行細胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集細胞及細胞培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離(li)心4 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，用PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數(shu)量(liang)加入(ru)無血(xue)清細胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次拿(na)取。

公司(si)正(zheng)在出售(shou)的(de)產(chan)品：

真菌/酵母硫-β-裂解酶（cystathionine β-lyase；CBL）活性比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

蛋白(bai)質西方(fang)雜交免(mian)疫印跡DAB顯色(se)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

DH10B細菌

載玻片(pian)細胞CASPASE-7蛋白(bai)表達(da)熒光顯微(wei)鏡(jing)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

通用型阪崎(qi)腸(chang)桿菌（Enterobacter sakazakii）基因(yin)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

通用樣品稀釋緩沖(chong)液(ye)

組織(zhi)磷酸二(er)酯(zhi)酶3（PDE3）活性熒光定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

冰凍切片(pian)氧(yang)化(hua)應(ying)激(ji)活(huo)性氧（ROS）紅(hong)色(se)熒光測定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)（超氧(yang)陰(yin)離(li)子）

石(shi)蠟(la)切(qie)片(pian)色(se)素霍(huo)爾(er)（Hall）染色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)

組織(zhi)脯肽酶(mei)（prolidase；PLD）克林納(na)（Chinard）比色(se)法

CDK2蛋白(bai)表達(da)西方(fang)雜交分(fen)析試(shi)劑(ji)盒(he)

食物總(zong)澱粉+直(zhi)鏈+支(zhi)鏈澱粉比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

體外脘蛋白(bai)去(qu)糖(tang)基化(hua)試(shi)劑(ji)盒(he)

血(xue)液(ye)（UROKINASE）活性熒光定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

呼吸(xi)鏈依賴(lai)性純(chun)化(hua)線(xian)粒(li)體氧化(hua)應(ying)激(ji)活(huo)性氧（ROS）初級熒光測定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)

著(zhe)絲點(dian)關聯(lian)蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體

肝細胞生(sheng)長因(yin)子α抗(kang)體

染色(se)體結(jie)構維(wei)持蛋(dan)白(bai)5抗(kang)體

KIAA1161蛋白(bai)抗(kang)體

細胞角蛋(dan)白(bai)9重組兔單(dan)克隆抗(kang)體

α-乳清蛋白(bai)單(dan)克隆抗(kang)體

藍色(se)敏感的色(se)素 (厚(hou)皮(pi)) 抗(kang)體

HCT116AKT1/2(-/-)細胞ATP依賴(lai)的解(jie)旋(xuan)酶CHD7抗(kang)體

鋅指(zhi)脂(zhi)蛋白(bai)-1b抗(kang)體

三(san)、培養註意(yi)事項 

1. 收(shou)到細胞後(hou)首先(xian)觀(guan)察細胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養液(ye)是否(fou)有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等現象，若(ruo)有(you)上述現象 發(fa)生(sheng)請(qing)及時和我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細胞說(shuo)明書(shu)，了(le)解細胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如細胞形態、所(suo)用(yong)培養基、血(xue)清比例、所需(xu) 細胞因(yin)子等，確保細胞培(pei)養條件壹(yi)致(zhi)，若由(you)於(yu)培(pei)養條件不(bu)壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞出(chu)現問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自(zi)行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞瓶(ping)表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問題(ti)，部(bu)分(fen)細胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破碎形成(cheng)碎片，是正(zheng)常(chang)現象。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細胞可(ke)以(yi)消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞直(zhi)接(jie)混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培養基重(zhong)懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的(de)培(pei)養瓶或(huo)培養皿中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同條件的(de)培(pei)養基用(yong)於(yu)細胞培(pei)養。

6. 建議客戶(hu)收到細胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾張(zhang)細胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因(yin)，個別敏感細胞會(hui)出(chu)現不(bu)穩定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及時和我(wo)們聯系(xi)，告(gao)知細胞 的(de)具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們的技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題解決。

7. 該(gai)細胞僅供科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用的(de)培(pei)養基 (灌(guan)液(ye)培養基) 不(bu)能(neng)再用(yong)來(lai)培(pei)養細胞，請(qing)換用(yong)按照說明書(shu)細胞培(pei) 養條件新配(pei)制的培(pei)養基來(lai)培(pei)養細胞。     收(shou)到細胞後(hou)第壹次傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。