HEL9217細胞(bao)

公司產品(pin)僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

壹、商品(pin)介(jie)紹(shao)：

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回縮變圓後加入 5ml 培(pei)養

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回縮變圓後加入培(pei)養液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量的凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並放(fang)置於(yu)凍存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將細胞(bao)凍存(cun)管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後轉入液(ye)氮中進行(xing)長期保(bao)存(cun)。使(shi)用程序(xu)

降溫(wen)盒(he)可直接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞(bao)培(pei)養操作

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處理僅(jin)供(gong)參(can)考，具體操(cao)作步驟(zhou)以隨貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書為(wei)主。將含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管在 37℃水浴中迅速(su)搖晃解凍，加4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入含(han)適(shi)量培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過夜（或將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿中，加入約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜）。第二(er)天換液(ye)並檢查(zha)細胞(bao)密(mi)度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂離(li)子的PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤所有(you)細胞(bao)，將培(pei)養瓶置於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況(kuang)而定），然(ran)後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若細胞(bao)大(da)部分變圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹勻(yun)。

c、將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分到新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長狀態(tai)良好時，可進行(xing)細胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝入無(wu)菌(jun)離心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清洗(xi)壹遍，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數量加入無(wu)血(xue)清細胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意凍存(cun)管做好標(biao)識。將凍存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入液(ye)氮灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管位置以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取。

公司正在出售(shou)的產(chan)品(pin)：

植物硫-β-裂解酶(mei)（cystathionine β-lyase；CBL）活性(xing)比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)

蛋白(bai)質(zhi)西(xi)方雜交(jiao)免(mian)疫印跡消(xiao)除(chu)試(shi)劑盒(he)

DH10B鈣轉感受態(tai)細菌(jun)

冰凍切(qie)片組織CASPASE-7蛋白(bai)表(biao)達熒光顯微(wei)鏡檢(jian)測試(shi)劑盒(he)

通用型（Staphylococcus aureus）基(ji)因(yin)檢測試劑(ji)盒(he)

抗體稀(xi)釋(shi)緩沖(chong)液(ye)

血(xue)液(ye)磷酸二(er)酯(zhi)酶(mei)3（PDE3）活性(xing)熒光定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)

細胞(bao)培(pei)養液(ye)氧化應(ying)激(ji)活(huo)性(xing)氧（ROS）紅(hong)色熒光測定試(shi)劑(ji)盒(he)（超(chao)氧陰離子）

冰凍切(qie)片色素霍(huo)爾（Hall）染(ran)色試劑(ji)盒(he)

血(xue)液(ye)脯肽酶(mei)（prolidase；PLD）克(ke)林(lin)納(na)（Chinard）比色法(fa)

CDK2蛋白(bai)免(mian)疫共(gong)沈澱分析試劑(ji)盒(he)

植物總(zong)澱(dian)粉+直鏈+支鏈澱(dian)粉(fen)比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)

體外脘蛋白(bai)轉化（in vitro conversion）分析試劑(ji)盒(he)

體液(ye)（UROKINASE）活性(xing)熒光定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)

活體細胞(bao)線(xian)粒體(ti)損(sun)傷(shang)/氧化（NAO）熒光測定試(shi)劑(ji)盒(he)

著(zhe)絲粒(li)ZW10相互作(zuo)用(yong)蛋白(bai)1抗體

肝細胞(bao)生(sheng)長因(yin)子β抗體

染(ran)色體結(jie)構(gou)維(wei)持蛋白(bai)6抗體

KIAA1191蛋白(bai)抗體

細胞(bao)角(jiao)膜(mo)蛋白(bai)多(duo)糖(tang)抗體

α-乳清蛋(dan)白(bai)抗體

老年癡(chi)呆相(xiang)關類鈣粘(zhan)蛋白(bai)CS1抗體

HEL9217細胞(bao)ATP依(yi)賴(lai)的解(jie)旋(xuan)酶(mei)CHD8抗體

鋅指脂蛋白(bai)-1c抗體

三、培(pei)養註意事(shi)項 

1. 收(shou)到細胞(bao)後(hou)首先(xian)觀(guan)察細胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等現象，若有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時(shi)和我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細胞(bao)說(shuo)明書，了(le)解細胞(bao)相(xiang)關信息，如細胞(bao)形態(tai)、所用(yong)培(pei)養基(ji)、血(xue)清比(bi)例(li)、所需(xu) 細胞(bao)因(yin)子等，確保細胞(bao)培(pei)養條(tiao)件(jian)壹致，若由於(yu)培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致而導(dao)致細胞(bao)出現(xian)問題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細胞(bao)瓶表(biao)面，顯微(wei)鏡下(xia)觀察細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問題(ti)，部分細胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞(bao)直接混(hun)勻(yun)收集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並接種(zhong)到新(xin)的培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿中，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中進行(xing)培(pei)養。

5. 請(qing)客戶(hu)用相同條(tiao)件(jian)的培(pei)養基(ji)用(yong)於(yu)細胞(bao)培(pei)養。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到細胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各拍幾張細胞(bao)照(zhao)片，記錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技(ji)術(shu)部溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏感細胞(bao)會出現(xian)不(bu)穩定的情況(kuang)，請(qing)及時(shi)和我們(men)聯(lian)系(xi)，告知細胞(bao) 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以便(bian)我(wo)們(men)的技(ji)術(shu)人員(yuan)跟蹤回訪直至(zhi)問題(ti)解(jie)決。

7. 該細胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運輸(shu)用的培(pei)養基(ji) (灌(guan)液(ye)培(pei)養基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養細胞(bao)，請(qing)換用(yong)按照說明書細胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件(jian)新(xin)配制(zhi)的培(pei)養基(ji)來(lai)培(pei)養細胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。