HEPG2/221細(xi)胞

公(gong)司產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科研研究使用、不(bu)得(de)用於臨床(chuang)診(zhen)斷！

壹(yi)、商品(pin)介紹(shao)：

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加(jia)入 5ml 培養(yang)

液(ye)終止消化(hua)，再(zai)輕輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比例進(jin)行分(fen)瓶傳代(dai)，最後放入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加(jia)入培養(yang)液(ye)終

止消化(hua)，輕輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放置於凍存(cun)管中；

4）先(xian)將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管放置於-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移(yi)入-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)中進(jin)行長(chang)期(qi)保存(cun)。使用程(cheng)序

降溫盒可直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操作

1) 復蘇細(xi)胞：以下細胞培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理(li)僅(jin)供(gong)參考，具體操作步(bu)驟以隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明書為主(zhu)。將含有1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍存(cun)管在 37℃水浴(yu)中迅速(su)搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將所有細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適量(liang)培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶中培養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換液(ye)並(bing)檢查(zha)細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清，用不(bu)含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤所有細胞，將培(pei)養(yang)瓶置於37℃培養(yang)箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而(er)定），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若細胞大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿回操作臺，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消化(hua)。輕輕(qing)打(da)勻後(hou)裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新皿(min)中或者(zhe)瓶中，置於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好時(shi)，可進(jin)行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為例；a、收集(ji)細(xi)胞及(ji)細胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清液(ye)，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加(jia)入無血清(qing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)液，使細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管做好標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管放入-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管位(wei)置以便下次(ci)拿取。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

組織硫(liu)-γ-合成(cheng)酶(mei)（cystathionine γ-synthase；CGS）活性(xing)比(bi)色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

瓊脂(zhi)糖(tang)凝(ning)膠法蛋(dan)白質(zhi)西方雜(za)交免疫(yi)印跡

GMS10細菌(jun)

載(zai)玻片(pian)細胞CASPASE-7蛋白表達(da)NBT顯色(se)光學(xue)顯(xian)微(wei)鏡檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

通(tong)用型(xing)宋(song)內誌賀菌Shigella sonnei 基(ji)因檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

非(fei)哺(bu)乳(ru)動(dong)物(wu)封(feng)阻(zu)緩沖(chong)液

組織磷(lin)酸(suan)二(er)酯酶(mei)4（PDE4）活性(xing)酶(mei)連續循(xun)環光(guang)譜(pu)法定(ding)量(liang)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

（超(chao)氧陰(yin)離(li)子(zi)）

冰凍(dong)切(qie)片(pian)色素(su)史(shi)汀（Stein）染色試(shi)劑(ji)盒

細菌(jun)脯(pu)肽(tai)酶(mei)（prolidase；PLD）克林納（Chinard）比色(se)法

細胞CDK3蛋白表達(da)流式(shi)細(xi)胞儀(yi)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

酒類(lei)精比(bi)色法定(ding)量(liang)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

脘蛋(dan)白糖(tang)基(ji)化分(fen)型(xing)（glycoform）試(shi)劑(ji)盒

組織（UROKINASE）活性(xing)比(bi)色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

真菌/酵母(mu)細(xi)胞線粒體(ti)損(sun)傷(shang)/氧化(hua)（NAO）熒光(guang)測定(ding)試(shi)劑(ji)盒

著絲(si)粒(li)蛋(dan)白36抗體(ti)

肝(gan)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子(zi)激活(huo)蛋白/HGF activator抗體(ti)

染色體(ti)濃(nong)縮(suo)調節(jie)蛋白2抗體(ti)

KIAA1276蛋白抗體(ti)

細胞連接相(xiang)關(guan)蛋(dan)白2抗體(ti)

α型-過氧(yang)化酶(mei)活化(hua)增生受(shou)體單克隆抗體(ti)

老年性(xing)癡(chi)呆蛋(dan)白APH2抗體(ti)

HEPG2/221細胞ATP依(yi)賴的(de)鋅金(jin)屬(shu)蛋(dan)白酶(mei)基(ji)因2蛋(dan)白抗體(ti)

鋅指(zhi)轉(zhuan)錄蛋(dan)白Sall1抗體(ti)

三(san)、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項 

1. 收到(dao)細(xi)胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞瓶是否(fou)完好，培(pei)養(yang)液(ye)是否(fou)有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若有上述現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀細胞說(shuo)明書，了(le)解細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞形(xing)態、所用培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保細胞培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若由於培養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致而(er)導致細胞出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任(ren)由 客戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭(shi)細胞瓶表面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞由於溫度 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡(wang)破碎(sui)形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可以消化，懸浮細(xi)胞直(zhi)接(jie)混勻(yun)收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮的(de)培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同條件(jian)的(de)培養(yang)基(ji)用於細胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍幾張細(xi)胞照片(pian)，記錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於和我(wo)司技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由於運輸的(de)原因(yin)，個別(bie)敏感細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩定的(de)情況，請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們聯系(xi)，告知(zhi)細胞 的(de)具體情況(kuang)，以便我(wo)們的(de)技術人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪直至問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該細胞僅(jin)供(gong)科研使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來(lai)培養(yang)細(xi)胞，請(qing)換(huan)用按(an)照說(shuo)明書細胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新配制的(de)培養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後(hou)第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。