Hep3B細(xi)胞

公司(si)產品(pin)僅供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

壹、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋培養瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培養基重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例進行分(fen)瓶傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋培養瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍存管中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞凍(dong)存管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進行長期(qi)保(bao)存。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培養操作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培養凍存處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體操作步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明書(shu)為主。將含有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管在(zai) 37℃水浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培養基混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心3 min，棄(qi)去上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將所有細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量培養基的培養瓶中培養過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培養基，培養過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢查(zha)細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去培養上清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞，將培養瓶置於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況(kuang)而(er)定），然(ran)後在(zai)顯微鏡下(xia)觀察細(xi)胞消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養瓶後加(jia)2-3ml培養基終止(zhi)消(xiao)化。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例分(fen)到新(xin)的含8 mL培養基的新(xin)皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長狀態良(liang)好時，可(ke)進行細(xi)胞凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶為例；a、收(shou)集細(xi)胞及細(xi)胞培養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心4 min，棄(qi)去上清液(ye)，用PBS清洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細(xi)胞計數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量加(jia)入(ru)無血(xue)清細(xi)胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支凍存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管做(zuo)好標識。將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存管位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取。

公司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

細(xi)菌硫-γ-合(he)成(cheng)酶（cystathionine γ-synthase；CGS）活性(xing)比(bi)色(se)法定(ding)量檢測試(shi)劑盒

ECL化學(xue)發光(guang)檢測試(shi)劑盒

BJ5183細(xi)菌

冰凍切片組(zu)織(zhi)CASPASE-7蛋白表(biao)達(da)NBT顯色光(guang)學(xue)顯(xian)微鏡檢測試(shi)劑盒

通用型痢(li)疾誌(zhi)賀(he)菌(jun)Shigella dysenteriae基因檢測試(shi)劑盒

非(fei)蛋(dan)白(bai)封(feng)阻(zu)緩沖(chong)液(ye)

血(xue)液(ye)磷(lin)酸(suan)二(er)酯(zhi)酶4（PDE4）活性(xing)酶連(lian)續循(xun)環光(guang)譜(pu)法(fa)定量檢測試(shi)劑盒

植物氧化應(ying)激活性(xing)氧(yang)（ROS）紅(hong)色熒光(guang)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒（超氧(yang)陰離(li)子(zi)）

石(shi)蠟切片色(se)素格(ge)美林（Gmelin）染色(se)試(shi)劑盒

細(xi)胞脯(pu)氨酰(xian)肽(tai)酶（prolinase）比色法定(ding)量檢測試(shi)劑盒

載(zai)玻(bo)片(pian)細(xi)胞CDK3蛋白表(biao)達(da)熒光(guang)顯(xian)微(wei)鏡檢測試(shi)劑盒

飲(yin)料(liao)精(jing)比(bi)色法定(ding)量檢測試(shi)劑盒

細(xi)胞脘(wan)蛋白(bai)（PRION）蛋白表(biao)達(da)流(liu)式(shi)細(xi)胞儀檢測試(shi)劑盒

血(xue)液(ye)（UROKINASE）活性(xing)比(bi)色(se)法定(ding)量檢測試(shi)劑盒

純化線(xian)粒體溶解(jie)試(shi)劑盒

著絲粒蛋(dan)白(bai)A

肝細(xi)胞生(sheng)長因子(zi)激活物抑(yi)制(zhi)劑/HGFA Inhibitor 1抗體

染色(se)體濃縮調控蛋白(bai)1單克(ke)隆抗體

KIAA1310蛋白抗體

細(xi)胞命運決定(ding)因子(zi)DACH1抗體

α型-過(guo)氧化酶活化增生(sheng)受(shou)體抗體

酪蛋白激(ji)酶3抗體

Hep3B細(xi)胞ATP依賴(lai)解(jie)螺(luo)旋(xuan)酶ETL1抗體

鋅指轉錄蛋(dan)白SALL2抗體

三、培養註意(yi)事項 

1. 收(shou)到細(xi)胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完好，培養液(ye)是(shi)否有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上述現象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關信(xin)息，如(ru)細(xi)胞形(xing)態(tai)、所用培養基、血(xue)清比(bi)例、所需(xu) 細(xi)胞因子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞培養條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養條件(jian)不壹(yi)致而(er)導致(zhi)細(xi)胞出現問(wen)題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶自行承擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞狀態。因運(yun)輸問(wen)題，部(bu)分(fen)細(xi)胞由(you)於溫(wen)度 變化及劇烈碰亡破碎形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀察(cha)好細(xi)胞狀態後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置於(yu) 37℃培養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮細(xi)胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養基重懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種到新(xin)的培養瓶或培養皿中，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進行培養。

5. 請(qing)客戶用相(xiang)同(tong)條件(jian)的培養基用於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建議客戶收(shou)到細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞照片，記錄細(xi)胞狀態，便於(yu)和(he)我司(si)技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由(you)於運輸的原因，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞會(hui)出現不穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請(qing)及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告知細(xi)胞 的(de)具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸用的(de)培養基 (灌液(ye)培養基) 不能(neng)再(zai)用來(lai)培養細(xi)胞，請(qing)換(huan)用按照說明書(shu)細(xi)胞培 養條件(jian)新配(pei)制(zhi)的培養基來(lai)培養細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。