HHC6548T1M1細胞

公司產(chan)品(pin)僅供科研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得用(yong)於臨(lin)床診斷！

壹、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸，然後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並(bing)放置(zhi)於凍存管中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞凍(dong)存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒(he)可直接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培(pei)養(yang)凍存(cun)處理僅(jin)供參(can)考，具體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書為主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞懸液的(de)凍(dong)存管在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條件下離心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸液加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢查細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代：如(ru)果細胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂離子的PBS潤(run)洗細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤(run)所(suo)有(you)細胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況(kuang)而定），然(ran)後在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞大(da)部分變(bian)圓並(bing)脫落，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞懸液按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待細胞生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集細胞及(ji)細胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中(zhong)，1000 rpm條件下離心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞數(shu)量加(jia)入(ru)無(wu)血清細胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍存(cun)管(guan)凍(dong)存1mL細胞懸液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮灌儲存(cun)。記(ji)錄凍存管(guan)位(wei)置以便下次(ci)拿取。

公司正(zheng)在(zai)出(chu)售的產(chan)品(pin)：

真菌(jun)/酵母(mu)硫-γ-合成酶（cystathionine γ-synthase；CGS）活性(xing)比色(se)法定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

DAB顯色(se)檢測(ce)試劑盒(he)

BJ5183鈣轉(zhuan)感(gan)受態細菌(jun)

石(shi)蠟(la)切片(pian)組(zu)織(zhi)CASPASE-7蛋(dan)白表(biao)達NBT顯色(se)光學(xue)顯微鏡(jing)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

通用(yong)型(xing)鮑氏(shi)誌賀(he)菌(jun)Shigella boydii基因(yin)檢測(ce)試劑盒(he)

AP底物pNPP緩沖(chong)溶(rong)液(ye)

細胞磷(lin)酸二(er)酯酶4（PDE4）活性(xing)熒(ying)光定量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

細胞內(nei)氧化(hua)應激(ji)活(huo)性(xing)氧（ROS）熒(ying)光測(ce)定試(shi)劑盒(he)（次(ci)氯酸離子）

冰凍(dong)切片(pian)色(se)素格美(mei)林(lin)（Gmelin）染色(se)試劑盒(he)

組(zu)織(zhi)脯(pu)氨酰(xian)肽(tai)酶（prolinase）比色(se)法定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

冰凍(dong)切片(pian)組(zu)織(zhi)CDK3蛋(dan)白表(biao)達熒(ying)光顯微鏡(jing)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

乳品(pin)酪(lao)蛋(dan)白比色(se)法定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

載玻(bo)片細胞脘(wan)蛋(dan)白（PRION）蛋(dan)白表(biao)達熒(ying)光顯微鏡(jing)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

體(ti)液（UROKINASE）活性(xing)比色(se)法定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

線(xian)粒(li)體(ti)復(fu)合物待測(ce)樣(yang)品(pin)預(yu)處理試(shi)劑盒(he)

著(zhe)絲(si)粒(li)蛋(dan)白C1抗體(ti)

肝細胞生(sheng)長因(yin)子(zi)激(ji)活(huo)抑(yi)制蛋(dan)白2抗體(ti)

染色(se)體(ti)濃縮(suo)調(tiao)控蛋(dan)白1抗體(ti)

KIAA1324L蛋(dan)白抗體(ti)

細胞膜(mo)蛋(dan)白Derlin抗體(ti)

α胰重鏈H4抗體(ti)

酪(lao)蛋(dan)白激(ji)酶(mei)6/乳腺腫(zhong)瘤(liu)激(ji)酶(mei)抗體(ti)

HHC6548T1M1細胞ATP依賴(lai)解(jie)旋(xuan)酶(mei)DDX17抗體(ti)

鋅指(zhi)轉錄蛋(dan)白Sall4抗體(ti)

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細胞後(hou)首先觀(guan)察(cha)細胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)有漏液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象 發(fa)生請及(ji)時和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱讀(du)細胞說明(ming)書，了(le)解(jie)細胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血清比例(li)、所(suo)需 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保細胞培(pei)養(yang)條件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條件不壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀(zhuang)態(tai)。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細胞由(you)於溫度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸浮細胞直接混(hun)勻(yun)收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重懸 細胞，並(bing)接種(zhong)到(dao)新(xin)的培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客(ke)戶用(yong)相(xiang)同條件的培(pei)養(yang)基用(yong)於細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天各拍幾(ji)張細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細胞狀(zhuang)態(tai)，便於和我司(si)技術(shu)部溝通 交(jiao)流(liu)。由(you)於運輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別敏(min)感(gan)細胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩定(ding)的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細胞 的(de)具體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我們(men)的(de)技術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液培(pei)養(yang)基) 不能再(zai)用(yong)來培(pei)養(yang)細胞，請(qing)換(huan)用(yong)按(an)照(zhao)說明(ming)書細胞培(pei) 養(yang)條件新(xin)配(pei)制的培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細胞。     收(shou)到(dao)細胞後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。