HCC1428細(xi)胞

公(gong)司產品僅(jin)供(gong)科(ke)研研究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

壹、商(shang)品介紹：

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再輕輕吹打細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然(ran)後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹打細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放置於(yu)凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入液(ye)氮中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培(pei)養(yang)凍存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步驟以隨(sui)貨(huo)產品說(shuo)明(ming)書(shu)為主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)3 min，棄去上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果細(xi)胞密(mi)度達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上清(qing)，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消化液(ye)浸潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞，將(jiang)培養(yang)瓶置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞消(xiao)化情況(kuang)，若細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回操(cao)作(zuo)臺，輕敲幾下培養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消(xiao)化。輕輕打勻後(hou)裝入無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上(shang)清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長狀態良好(hao)時，可進行(xing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下離心(xin)4 min，棄去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍，棄盡PBS，進行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清細(xi)胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置以(yi)便(bian)下次拿取(qu)。

公(gong)司正在出(chu)售的(de)產品：

組織(zhi)半（CASPASE）總活(huo)性(xing)熒(ying)光定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

等電聚(ju)焦蛋(dan)白(bai)電泳（IEF）10倍(bei)陰(yin)電泳緩(huan)沖液(ye)

半乳(ru)糖(tang)苷酶釋放法細(xi)菌膜(mo)損傷熒(ying)光檢測(ce)試劑盒(he)

細(xi)胞CASPASE-5蛋(dan)白(bai)表達比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

植物(wu)源(yuan)性食品芥末(mo)（mustard）基因(yin)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

10倍(bei)PBST濃縮(suo)緩(huan)沖清(qing)理溶(rong)液(ye)

組織(zhi)磷(lin)酸二(er)酯酶（PDE）總活(huo)性(xing)熒(ying)光定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

真(zhen)菌/酵(jiao)母(mu)細(xi)胞內(nei)氧(yang)化應激(ji)活(huo)性(xing)氧(yang)（ROS）初級綠色(se)熒(ying)光測(ce)定(ding)試(shi)劑盒(he)

冰凍(dong)切(qie)片小(xiao)膠質(zhi)細(xi)胞（MICROGLIA）

VMA高效(xiao)液(ye)相色(se)譜電化學定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

石(shi)蠟切(qie)片(pian)組織APC蛋(dan)白(bai)表達熒(ying)光顯微(wei)鏡(jing)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

酒類(lei)氨比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

細(xi)胞COLLAGEN I蛋(dan)白(bai)表達熒(ying)光定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

細(xi)胞基(ji)質金(jin)屬（MMP-2）免疫捕獲(huo)檢測(ce)試劑盒(he)

活(huo)體(ti)組(zu)織(zhi)線粒(li)體內(nei)膜功能/膜電位測(ce)定(ding)試(shi)劑盒(he)

長鏈脂肪酸連(lian)接(jie)酶ACSBG2抗體

肝(gan)腸鈣粘(zhan)連(lian)蛋(dan)白(bai)重(zhong)組兔單克隆(long)抗體

缺氧(yang)誘(you)導(dao)因(yin)子1α抑制(zhi)蛋(dan)白(bai)/HIF1AN單克隆(long)抗體

KIAA0427蛋(dan)白(bai)抗體

細(xi)胞角(jiao)蛋(dan)白(bai)73抗體

α-輔肌(ji)動(dong)蛋(dan)白(bai)1單克隆(long)抗體

賴甲(jia)基(ji)化抗體

HCC1428細(xi)胞ATP依賴RNA解旋酶DDX54抗體

鋅指蛋(dan)白(bai)ZIC5抗體

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等現象(xiang)，若有(you)上述現象(xiang) 發生請(qing)及時和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了解細(xi)胞相關信(xin)息，如細(xi)胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血(xue)清比(bi)例(li)、所需 細(xi)胞因(yin)子等(deng)，確(que)保細(xi)胞培(pei)養(yang)條件(jian)壹致(zhi)，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條件(jian)不壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞出(chu)現問題，責任由(you) 客(ke)戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦拭細(xi)胞瓶(ping)表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題，部分(fen)細(xi)胞由(you)於(yu)溫度 變(bian)化及劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀察好(hao)細(xi)胞狀態後(hou)，75%酒精消毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可(ke)以消(xiao)化，懸浮細(xi)胞直(zhi)接混(hun)勻收(shou)集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重(zhong)懸 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到新(xin)的培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿(min)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用(yong)相同條(tiao)件(jian)的(de)培養(yang)基用(yong)於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)前 3 天(tian)各拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀態，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏感細(xi)胞會(hui)出(chu)現不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及時和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技(ji)術人(ren)員跟(gen)蹤回訪直至(zhi)問題解決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供(gong)科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培養(yang)基) 不能(neng)再用(yong)來培養(yang)細(xi)胞，請(qing)換用(yong)按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新配制(zhi)的培(pei)養(yang)基來培養(yang)細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)第壹次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。