HCC1500細(xi)胞(bao)

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供科(ke)研研究使(shi)用、不得用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品介紹：

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終止消化，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養(yang)箱中培養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液(ye)終

止消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並放置於(yu)凍(dong)存管中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存(cun)管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後轉入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程序

降溫(wen)盒(he)可直接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培養(yang)凍(dong)存處理僅(jin)供參(can)考(kao)，具體(ti)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品說(shuo)明(ming)書為主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍(dong)存管在 37℃水(shui)浴(yu)中迅速(su)搖晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)含適量培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換液(ye)並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中，使消化液(ye)浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將培養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培養(yang)箱中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化情況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大部(bu)分變圓並脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止消化。輕(qing)輕(qing)打勻後裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿中或者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培養(yang)箱中培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數量加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻，每支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存管位置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：

組織(zhi)羧酸(suan)酯(zhi)酶（carboxylesterase；CE）活性(xing)比(bi)色法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

等(deng)電(dian)聚焦蛋白電泳（IEF）10倍祛(qu)色溶(rong)液(ye)

細(xi)菌(jun)合(he)成(cheng)基(ji)礎培養(yang)液(ye)（SBE）

CASPASE-5蛋(dan)白表達(da)西方(fang)雜(za)交分析(xi)試(shi)劑盒(he)

植(zhi)物(wu)源性(xing)食(shi)品羽扇(shan)豆（lupine）基(ji)因檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

透(tou)射(she)電鏡(jing)（TEM）制片處理試劑盒(he)

細(xi)胞(bao)磷酸(suan)二(er)酯(zhi)酶1（PDE1）活性(xing)酶(mei)連續(xu)循環(huan)光(guang)譜法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

植(zhi)物(wu)細(xi)胞(bao)內氧(yang)化應(ying)激(ji)活性(xing)氧(yang)（ROS）初(chu)級(ji)熒(ying)光(guang)測定(ding)試劑盒(he)

石(shi)蠟切片少(shao)突(tu)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)（OLIGODENDROCYTE）O4抗(kang)體(ti)免(mian)疫組化染(ran)色試(shi)劑盒(he)

TRP高(gao)效液(ye)相色譜電(dian)化學(xue)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

冰(bing)凍切(qie)片(pian)組織(zhi)APC蛋(dan)白表達(da)NBT顯(xian)色光(guang)學顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

食(shi)物(wu)氨(an)比(bi)色法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

COLLAGEN I蛋(dan)白免(mian)疫共(gong)沈(chen)澱(dian)分析(xi)試(shi)劑盒(he)

體(ti)液(ye)基(ji)質(zhi)金(jin)屬（MMP-2）免(mian)疫捕(bu)獲檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

冰(bing)凍切(qie)片(pian)線(xian)粒(li)體(ti)內(nei)膜功能/膜電位測(ce)定(ding)試劑盒(he)

長(chang)鏈脂肪酸(suan)酰基(ji)水(shui)解酶抗(kang)體(ti)

肝(gan)黃素單加(jia)氧(yang)酶(mei)1抗(kang)體(ti)

缺氧誘(you)導(dao)因子1β/HIF-1β抗(kang)體(ti)

KIAA0513蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

細(xi)胞(bao)角蛋(dan)白(bai)75抗(kang)體(ti)

α-輔(fu)肌(ji)動蛋(dan)白4重(zhong)組兔(tu)單克隆(long)抗(kang)體(ti)

賴羥化酶(mei)2抗(kang)體(ti)

HCC1500細(xi)胞(bao)ATP依賴RNA解旋酶(mei)DDX56抗體(ti)

鋅(xin)指(zhi)蛋白ZNF377抗體(ti)

三、培養(yang)註意(yi)事項 

1. 收到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好，培養(yang)液(ye)是(shi)否有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若有上(shang)述現(xian)象 發生(sheng)請(qing)及時和我們(men)聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解細(xi)胞(bao)相關信(xin)息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態、所用(yong)培養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因子等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培養(yang)條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若由(you)於(yu)培養(yang)條(tiao)件不(bu)壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問題，責任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運輸(shu)問題，部分細(xi)胞(bao)由於(yu)溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎形成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀察好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直接(jie)混勻收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的(de)培養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿中，置於(yu)培養(yang)箱中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同條(tiao)件的(de)培養(yang)基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於和我司技(ji)術(shu)部溝(gou)通 交流。由(you)於(yu)運輸(shu)的(de)原因，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現(xian)不穩定(ding)的(de)情況(kuang)，請(qing)及時和我們(men)聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的(de)技(ji)術(shu)人員跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至(zhi)問題解決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研使用(yong)。

8. 備註：運輸(shu)用(yong)的(de)培養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不(bu)能再用(yong)來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配制的(de)培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。