HARA-B細胞

公司產(chan)品僅供科(ke)研(yan)研究使(shi)用、不(bu)得用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷！

壹、商品介(jie)紹(shao)：

1、細胞傳代(dai)：

1）細胞生長至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細胞壹次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變圓後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打細胞使之脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱(dian)細胞用 1-2ml 培養基(ji)重懸(xuan)，然後按 1:2 比例(li)進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細胞壹次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變圓後加入培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細胞使之脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於凍存管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍存管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行長期保(bao)存。使用(yong)程序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直接放入-80℃。

二(er)、細胞培養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以(yi)下細胞培養凍存處(chu)理僅供參(can)考(kao)，具(ju)體操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說明書(shu)為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液的凍存管在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件下(xia)離(li)心3 min，棄去上(shang)清液，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有細胞懸(xuan)液加入含(han)適(shi)量培養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細胞懸(xuan)液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天換液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細胞密度。

2) 細胞傳代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密度達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄去培養(yang)上(shang)清，用不(bu)含鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有細胞，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞情況(kuang)而定），然後在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細胞大(da)部分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄去上(shang)清液，補加1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按1:2比例(li)分(fen)到新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tai)良好時，可(ke)進(jin)行細胞凍存。下面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞及(ji)細胞培養液，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離(li)心4 min，棄去上(shang)清液，用PBS清洗(xi)壹遍，棄盡PBS，進(jin)行細胞計(ji)數。

b、根(gen)據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存管凍存1mL細胞懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍存管做好標識(shi)。將(jiang)凍存管放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄凍存管位置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿取(qu)。

公司正在(zai)出售(shou)的產(chan)品：

細胞半(ban)-12（CASPASE-12）活(huo)性(xing)熒(ying)光(guang)定量檢測試劑(ji)盒

6%蛋(dan)白電泳(yong)分離(li)預制(zhi)膠溶(rong)液

線(xian)蟲基(ji)因(yin)組(zu)DNA分(fen)離試劑(ji)盒

細胞HISTONE H3蛋(dan)白表(biao)達熒光(guang)定量檢測試劑(ji)盒

植(zhi)物源(yuan)性食品榛果(guo)（hazelnut）基(ji)因(yin)檢(jian)測試劑(ji)盒

10倍磷酸(suan)平衡鹽(yan)（PBS）緩(huan)沖(chong)溶(rong)液(ye)

組(zu)織(zhi)糖原磷酸(suan)化(hua)酶(mei)（GLYCOGEN PHOSPHORYLASE）活(huo)性(xing)

超(chao)氧化(hua)物歧(qi)化(hua)酶(mei)（SOD）活(huo)性(xing)檢(jian)測試劑(ji)盒（附(fu)標準樣）

冰(bing)凍切片神經(jing)膠質染色試劑(ji)盒

5-HIAA高(gao)效液相色譜(pu)電化學(xue)定量檢測試劑(ji)盒

?石(shi)蠟切片組(zu)織(zhi)COLLAGEN III蛋(dan)白表(biao)達NBT顯色光(guang)學(xue)顯微(wei)鏡(jing)檢(jian)測試劑(ji)盒

豆(dou)制(zhi)品U（S-Methylmethionine）比色法定量檢測試劑(ji)盒

RUNX3蛋(dan)白表(biao)達ELISA定量檢測試劑(ji)盒

細胞基(ji)質金(jin)屬(shu)（MMP-9）明膠(jiao)法(fa)比色定量檢測試劑(ji)盒

動物(wu)細胞/組(zu)織(zhi)線粒體粗(cu)提分(fen)離試劑(ji)盒

粘脂蛋(dan)白1抗(kang)體

肝(gan)癌(ai)相關抗(kang)原57抗(kang)體

缺氧誘(you)導基(ji)因(yin)1B蛋(dan)白抗(kang)體

Ki67蛋(dan)白重組(zu)兔單(dan)克隆抗(kang)體

細胞角蛋(dan)白4抗(kang)體

α-L-艾(ai)杜(du)糖苷酶(mei)抗(kang)體

辣(la)椒素(su)受體5抗(kang)體

HARA-B細胞ATP依賴RNA解(jie)旋(xuan)酶(mei)DDX28抗(kang)體

鋅(xin)指(zhi)蛋(dan)白ZBTB3抗(kang)體

三、培(pei)養註意(yi)事項(xiang) 

1. 收到細胞後首(shou)先(xian)觀察細胞瓶是否完好(hao)，培養(yang)液是(shi)否有漏(lou)液、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生請及(ji)時和(he)我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞說明書(shu)，了(le)解(jie)細胞相關信息，如(ru)細胞形態、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血清比例(li)、所(suo)需 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保(bao)細胞培養條件壹致(zhi)，若由於(yu)培(pei)養(yang)條件不(bu)壹致(zhi)而導致(zhi)細胞出現(xian)問題(ti)，責任(ren)由 客戶(hu)自行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細胞瓶表(biao)面，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細胞狀態。因(yin)運輸問題(ti)，部分(fen)細胞由於(yu)溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形成碎(sui)片，是(shi)正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察好(hao)細胞狀態後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細胞可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直接混勻(yun)收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種到新(xin)的培(pei)養(yang)瓶或培養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請客戶(hu)用相同(tong)條件的培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於(yu)細胞培養。

6. 建議(yi)客戶(hu)收到細胞後前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞狀態，便(bian)於和(he)我(wo)司技(ji)術(shu)部溝通 交流。由於(yu)運輸的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感(gan)細胞會出現(xian)不(bu)穩定的情(qing)況(kuang)，請及(ji)時和(he)我(wo)們聯系(xi)，告(gao)知細胞 的具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們的技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤(zong)回訪(fang)直至問題(ti)解決。

7. 該(gai)細胞僅供科(ke)研(yan)使用。

8. 備註：運輸用(yong)的培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能再(zai)用(yong)來培(pei)養(yang)細胞，請換用(yong)按照(zhao)說明書(shu)細胞培 養條件新(xin)配(pei)制(zhi)的培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細胞。     收到細胞後第(di)壹次傳代(dai)建議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。