更(geng)新(xin)時間:2025-11-29
Y190 感受(shou)態細胞(bao)100ul*10是(shi)采用大腸(chang)桿(gan)菌(jun)經(jing)特殊工(gong)藝處(chu)理(li)得到的(de)感受(shou)態細胞(bao),可(ke)用於DNA 的(de)化學轉(zhuan)化。使(shi)用pUC19 質粒(li)檢測(ce),轉(zhuan)化效(xiao)率可(ke)達108個(ge)轉化子(zi)/μg質粒(li)DNA,-70℃保(bao)存3個月轉(zhuan)化效(xiao)率可(ke)保(bao)持(chi)在90%以上(shang)。
Y190 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*10以下是(shi)的(de)訂(ding)購信(xin)息儲(chu)存條件:-70℃凍(dong)存
操作(zuo)方(fang)法:
1. 取-80℃保(bao)存的(de)農(nong)桿(gan)菌(jun)感(gan)受(shou)態於室(shi)溫(wen)或(huo)手(shou)心(xin)片(pian)刻待其(qi)部(bu)分融化,處(chu)於(yu)冰水(shui)混(hun)合(he)狀(zhuang)態時插(cha)入冰(bing)中(zhong)。
2.每100 μl感(gan)受(shou)態加入0.01-1 μg質(zhi)粒(li)DNA(轉(zhuan)化效(xiao)率較(jiao)高(gao),*次(ci)使(shi)用前做(zuo)預(yu)實(shi)驗(yan)確(que)定所加(jia)質粒(li)的(de)量),用手(shou)管(guan)底(di)混勻(yun),依(yi)次(ci)於(yu)冰(bing)上靜(jing)置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水(shui)浴(yu)5分鐘、冰浴(yu)5分鐘。
3. 加入700 μl無(wu)抗(kang)生素的(de)LB或(huo)YEB液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji),於28℃振蕩(dang)培(pei)養(yang)2~3小(xiao)時。
Y190 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*104. 6000 rpm離(li)心(xin)壹(yi)分鐘收菌,留(liu)取100 μl左(zuo)右上清(qing)輕輕吹打(da)重(zhong)懸(xuan)菌塊(kuai)塗布(bu)於(yu)含(han)相應抗(kang)生素的(de)LB或(huo)YEB平(ping)板(ban)上(shang),倒置放於(yu)28℃培(pei)養(yang)箱(xiang)培(pei)養(yang)2-3天(tian)
註意事項(xiang)
1. 加入質(zhi)粒(li)時體(ti)積不(bu)應大於(yu)感受(shou)態體(ti)積的(de)1/10;質粒(li)不純(chun)或(huo)存在乙醇(chun)等有(you)機(ji)物(wu)汙(wu)染,轉(zhuan)化效(xiao)率急(ji)劇(ju)下降(jiang);質粒(li)增大壹(yi)倍(bei),轉(zhuan)化效(xiao)率下降(jiang)壹(yi)個數(shu)量級(ji)。
2. 混(hun)入質(zhi)粒(li)時應(ying)輕柔操(cao)作。轉(zhuan)化高(gao)濃(nong)度的(de)質粒(li)可(ke)相應(ying)減(jian)少終用於塗板(ban)的(de)菌量(liang)。
3. 平板上(shang)陽(yang)性(xing)克(ke)隆密度過大時,由於(yu)營(ying)養不(bu)足(zu),陽(yang)性克隆生長變(bian)慢,菌落變(bian)小,為了獲得大的(de)菌落,應減(jian)少質粒用量。
4. 濃(nong)度不應(ying)高(gao)於(yu)25 μg/ml,過高(gao)的(de)濃度不利於農(nong)桿(gan)菌(jun)生長,會降(jiang)低其(qi)生長速(su)度和轉(zhuan)化效(xiao)率。本(ben)公(gong)司感(gan)受(shou)態計(ji)算(suan)轉化效(xiao)率時所(suo)用平板(ban)只(zhi)含(han)有(you)50 μg/ml kan,若(ruo)所(suo)用平板(ban)含(han)有(you)20 μg/ml rif則(ze)轉化效(xiao)率降(jiang)低到1/2。
Y190 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*105. 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)加入的(de)目的(de)是(shi)防止(zhi)雜菌(jun)生長、篩選農(nong)桿(gan)菌(jun);根(gen)據所(suo)用菌株(zhu)抗(kang)性(xing)加入Ti質(zhi)粒(li)篩(shai)選(xuan)抗(kang)生素可(ke)防止(zhi)Ti質粒(li)丟(diu)失,但Ti質(zhi)粒(li)篩(shai)選(xuan)抗(kang)生素不利於農(nong)桿(gan)菌(jun)的(de)轉基(ji)因操(cao)作,所以壹(yi)般(ban)培(pei)養(yang)農(nong)桿(gan)菌(jun)時不(bu)考慮(lv)這些抗(kang)生素,Ti質粒(li)丟(diu)失的(de)概率極低(di)(可(ke)以忽(hu)略(lve))。
CORT 人(ren)皮(pi)質酮/腎(shen)上腺(xian)酮(tong) 規格: 48T/96T
Cortisol 人(ren) 規格: 48T/96T
CLA 人(ren)皮(pi)膚淋巴細(xi)胞相(xiang)關抗(kang)原(yuan) 規格: 48T/96T
SRF/IF 人(ren)皮(pi)膚反(fan)應因(yin)子(zi)/炎(yan)性(xing)因子(zi) 規格: 48T/96T
DPT 人(ren)皮(pi)膚蛋(dan)白(bai) 規格: 48T/96T
CTACK/CCL27 人(ren)皮(pi)膚T細胞(bao)虜(lu)獲趨(qu)化因(yin)子(zi) 規格: 48T/96T
FSA 人(ren)胚(pei)胎性硫(liu)糖蛋(dan)白(bai)抗(kang)原(yuan) 規格: 48T/96T
CIAP 人(ren)牛(niu)小腸堿(jian)性磷酸(suan)酶(mei) 規格: 48T/96T
FⅫ 人(ren)Ⅻ 規格: 48T/96T
FⅩⅢ 人(ren)ⅩⅢ 規格: 48T/96T
FⅩ 人(ren)Ⅹ 規格: 48T/96T
FⅨ 人(ren)Ⅸ 規格: 48T/96T
Ⅷ-Ag 人(ren)Ⅷ相(xiang)關抗(kang)原(yuan) 規格: 48T/96T
FⅢ 人(ren)Ⅲ 規格: 48T/96T
FⅡ 人(ren)Ⅱ 規格: 48T/96T
F1+2 人(ren)原(yuan)片(pian)段F1+2 規格: 48T/96T
T-TM 人(ren)血栓調(tiao)節(jie)蛋(dan)白(bai)復合(he)物(wu) 規格: 48T/96T
TR 人(ren)受(shou)體(ti) 規格: 48T/96T
TAT 人(ren)抗(kang)復(fu)合物(wu) 規格: 48T/96T
Gelsolin 人(ren)凝(ning)溶膠(jiao)蛋(dan)白(bai) 規格: 48T/96T
CLU 人(ren)凝(ning)聚(ju)素 規格: 48T/96T
gelson 人(ren)凝(ning)膠(jiao)原蛋(dan)白(bai) 規格: 48T/96T
UFC 人(ren)尿(niao)遊離 規格: 48T/96T
ALB 人(ren)尿(niao)微(wei)量(liang)白(bai)蛋(dan)白(bai) 規格: 48T/96T
UreC 人(ren)尿(niao)素酶(mei)相關蛋(dan)白(bai)C 規格: 48T/96T
PLAUR/uPAR 人(ren)型(xing)纖溶酶(mei)原激(ji)活(huo)物(wu)受(shou)體(ti) 規格: 48T/96T
uPA/PLAU 人(ren)型(xing)纖溶酶(mei)原激(ji)活(huo)物(wu) 規格: 48T/96T
uPA/PLAU 人(ren)型(xing)纖溶酶(mei)原激(ji)活(huo)物(wu) 規格: 48T/96T
uPA 人(ren)型(xing)纖溶酶(mei)原激(ji)活(huo)物(wu) 規格: 48T/96T
UK 人(ren) 規格: 48T/96T
UP 人(ren)尿(niao)蛋(dan)白(bai) 規格: 48T/96T
GDI 人(ren)鳥苷(gan)酸(suan)解離(li)抑(yi)制因子(zi) 規格: 48T/96T
GEF 人(ren)鳥苷(gan)酸(suan)交(jiao)換(huan)因(yin)子(zi) 規格: 48T/96T
ODC 人(ren)脫(tuo)羧酶(mei) 規格: 48T/96T
ODC 人(ren)脫(tuo)羧酶(mei) 規格: 48T/96T
OCT 人(ren)氨(an)基(ji)甲酰(xian)轉(zhuan)移酶(mei) 規格: 48T/96T
Y190 感受(shou)態細胞(bao)100ul*10 FAK 人(ren)黏著(zhe)斑(ban)激(ji)酶(mei) 規格: 48T/96T
MAdCAM-1 人(ren)黏膜(mo)地址素細胞(bao)黏附(fu)分子(zi) 規格: 48T/96T
BDNF 人(ren)腦源(yuan)性(xing)神(shen)經(jing)營(ying)養(yang)因(yin)子(zi) 規格: 48T/96T
BNP 人(ren)腦鈉(na)素/腦鈉(na)尿(niao)肽 規格: 48T/96T