更(geng)新(xin)時(shi)間(jian):2025-11-29
lNVSc1 感受(shou)態(tai)細胞(bao)100ul*50菌(jun)株壹(yi)種常(chang)用於(yu)質粒克(ke)隆(long)的菌(jun)株。其(qi)φ80lacZΔM15基(ji)因的產(chan)物(wu)可(ke)與(yu)pUC載體(ti)編(bian)碼的b-半(ban)乳糖苷(gan)酶氨基(ji)端實現a互補,可(ke)用於(yu)藍(lan)白斑篩(shai)選(xuan)。recA1和(he)endA1 的突變(bian)有利於(yu)克(ke)隆DNA 的穩(wen)定(ding)和高純度(du)質粒DNA的提取(qu)。
lNVSc1 感受態(tai)細胞(bao)100ul*50以下是的訂購(gou)信息(xi)儲(chu)存條(tiao)件(jian):-70℃凍(dong)存
操作(zuo)方(fang)法(fa):
1. 取(qu)-80℃保存的農(nong)桿(gan)菌感受(shou)態(tai)於(yu)室溫或手(shou)心片刻待(dai)其部(bu)分(fen)融化(hua),處於(yu)冰水混(hun)合狀(zhuang)態(tai)時(shi)插入(ru)冰中。
2.每(mei)100 μl感受(shou)態(tai)加(jia)入0.01-1 μg質粒DNA(轉化效率(lv)較高,*次(ci)使(shi)用前做(zuo)預(yu)實驗(yan)確(que)定(ding)所加(jia)質粒的量(liang)),用手(shou)管底混(hun)勻,依(yi)次(ci)於(yu)冰上靜(jing)置5分(fen)鐘(zhong)、液(ye)氮5分(fen)鐘(zhong)、37℃水(shui)浴5分(fen)鐘(zhong)、冰浴5分(fen)鐘(zhong)。
3. 加(jia)入700 μl無(wu)抗生素的LB或(huo)YEB液(ye)體培養基(ji),於(yu)28℃振(zhen)蕩培(pei)養2~3小時(shi)。
4. 6000 rpm離心壹(yi)分(fen)鐘(zhong)收菌(jun),留取(qu)100 μl左右(you)上清(qing)輕輕吹(chui)打重懸菌塊(kuai)塗(tu)布(bu)於(yu)含(han)相應抗生素的LB或(huo)YEB平板(ban)上,倒置(zhi)放(fang)於(yu)28℃培(pei)養箱(xiang)培養2-3天(tian)
lNVSc1 感受(shou)態(tai)細胞(bao)100ul*50註意(yi)事(shi)項
1. 加(jia)入質粒時(shi)體積不(bu)應(ying)大(da)於(yu)感(gan)受態(tai)體積的1/10;質粒不(bu)純(chun)或(huo)存在(zai)乙(yi)醇等有機物(wu)汙染(ran),轉化效率(lv)急劇(ju)下降(jiang);質粒增(zeng)大壹(yi)倍,轉化效率(lv)下降壹(yi)個數(shu)量級(ji)。
2. 混(hun)入質粒時(shi)應輕柔(rou)操作(zuo)。轉化高濃度(du)的質粒可(ke)相(xiang)應(ying)減(jian)少終用於(yu)塗(tu)板(ban)的菌(jun)量(liang)。
3. 平板(ban)上陽(yang)性克隆(long)密度過大(da)時(shi),由於(yu)營養不(bu)足(zu),陽(yang)性克隆(long)生長(chang)變(bian)慢,菌落變(bian)小,為(wei)了獲(huo)得(de)大的菌(jun)落,應(ying)減少(shao)質粒用量(liang)。
4. 濃(nong)度不(bu)應(ying)高於(yu)25 μg/ml,過高的濃(nong)度(du)不(bu)利於(yu)農(nong)桿菌生長(chang),會(hui)降(jiang)低(di)其(qi)生長(chang)速度和(he)轉化效率(lv)。本(ben)公(gong)司感受態(tai)計算(suan)轉化效率(lv)時(shi)所用平板(ban)只含(han)有50 μg/ml kan,若所用平板(ban)含有20 μg/ml rif則轉化效率(lv)降低(di)到1/2。
lNVSc1 感受態(tai)細胞(bao)100ul*505. 培(pei)養基(ji)中(zhong)加(jia)入的目(mu)的是(shi)防(fang)止(zhi)雜(za)菌(jun)生長(chang)、篩(shai)選(xuan)農(nong)桿(gan)菌(jun);根(gen)據(ju)所(suo)用菌(jun)株抗性加(jia)入Ti質粒篩(shai)選(xuan)抗生素可(ke)防(fang)止(zhi)Ti質粒丟(diu)失,但(dan)Ti質粒篩(shai)選(xuan)抗生素不(bu)利於(yu)農(nong)桿菌的轉基因(yin)操(cao)作(zuo),所(suo)以壹(yi)般(ban)培(pei)養農(nong)桿(gan)菌時(shi)不(bu)考(kao)慮(lv)這些(xie)抗生素,Ti質粒丟(diu)失的概率極低(di)(可(ke)以忽略)。
PI Ab-IgG/IgM 人磷(lin)脂(zhi)酰(xian)肌醇抗體IgG/IgM 規格: 48T/96T
GPC-3 人磷(lin)脂(zhi)酰(xian)肌醇蛋(dan)白聚(ju)糖3 規格: 48T/96T
PL-A2 人磷(lin)脂(zhi)酶A2 規格: 48T/96T
PCK 人磷(lin)酸(suan)烯(xi)醇式(shi)丙酮(tong)酸羧(suo)激酶 規格: 48T/96T
PGM 人磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖變(bian)位(wei)酶 規格: 48T/96T
PI3K 人磷(lin)酸(suan)肌醇3激酶 規格: 48T/96T
PaCoA 人磷(lin)酸(suan)化(hua)乙酰 規格: 48T/96T
pERK 人磷(lin)酸(suan)化(hua)細胞(bao)外(wai)信號調(tiao)節激酶 規格: 48T/96T
P-PKC 人磷(lin)酸(suan)化(hua)蛋(dan)白激酶C 規格: 48T/96T
PGAM2 人磷(lin)酸(suan)甘油酸(suan)變位(wei)酶2 規格: 48T/96T
人淋巴細胞(bao)因(yin)子ELISA Kit,48T/96T 人(ren)淋巴(ba)細胞(bao)因(yin)子ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T
Lptn/LTN/XCL1 人淋巴細胞(bao)趨化因子 規格: 48T/96T
LFA-3/CD58 人淋巴細胞(bao)功(gong)能相關(guan)抗原3 規格: 48T/96T
LFA-2/CD2 人淋巴細胞(bao)功(gong)能相關(guan)抗原2 規格: 48T/96T
LFA-1/CD11a+CD18 人淋巴細胞(bao)功(gong)能相關(guan)抗原1 規格: 48T/96T
LTB 人淋巴毒(du)素β 規格: 48T/96T
LTA 人淋巴毒(du)素α 規格: 48T/96T
LAP 人亮氨酰氨(an)基(ji)肽(tai)酶 規格: 48T/96T
SK 人鏈激酶 規格: 48T/96T
人痢疾內阿(e)米巴抗原ELISA Kit,48T/96T 人(ren)痢疾內阿(e)米巴抗原ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T
GS-ANA 人粒細(xi)胞(bao)特異性抗核抗體 規格: 48T/96T
GCP-2/CXCL6 人粒細(xi)胞(bao)趨化蛋(dan)白-2 規格: 48T/96T
GM-CSF Ab 人粒細(xi)胞(bao)巨噬細胞(bao)集落刺激因子抗體 規格: 48T/96T
GM-CSF 人粒細(xi)胞(bao)巨噬細胞(bao)集落刺激因子 規格: 48T/96T
G-CSF 人粒細(xi)胞(bao)集落刺激因子 規格: 48T/96T
KP 人利鉀(jia)尿(niao)肽 規格: 48T/96T
CG 人冷球蛋(dan)白 規格: 48T/96T
ORM 人類(lei)粘(zhan)蛋(dan)白 規格: 48T/96T
HTLV-Ⅰ 人類(lei)嗜(shi)T淋巴(ba)細胞(bao)Ⅰ型(xing)病毒(du) 規格: 48T/96T
RF 人類(lei)風(feng)濕因(yin)子(zi) 規格: 48T/96T
HLA-G 人類(lei)白細胞(bao)抗原G 規格: 48T/96T
HLA-E 人類(lei)白細胞(bao)抗原E 規格: 48T/96T
lNVSc1 感受態(tai)細胞(bao)100ul*50 HLA-C 人(ren)類(lei)白細胞(bao)抗原C 規格: 48T/96T
HLA-B27 人類(lei)白細胞(bao)抗原B27 規格: 48T/96T
HLA-A 人類(lei)白細胞(bao)抗原A 規格: 48T/96T